CTAB法提取DNA法试剂配制方法
1、1M Tris-HCl 1L配制量
配制方法 称量121.1g Tris 置于1L烧杯中。
加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
pH值 浓盐酸
7.4 70ml
7.6 60ml
8.0 42ml
将溶液定容到1L。
高温高压灭菌后,室温保存。 注意:应使溶液冷却后加调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2、10×TE Buffer 1L配制量
配制方法 量取下列溶液,置于1L 烧杯中
1M Tris-HCl Buffer (pH= ) 100ml 500mM EDTA (pH 8.0) 20ml
向烧杯中加入约800ml的去离子水,均匀混合。 将溶液定容到1L后,高温高压灭菌。 室温保存。
3、3M 醋酸钠 100ml配制量
配制方法 称量40.8g NaOAc.H2O 置于烧杯中,加入约40ml的去离子水搅拌溶解 加入冰醋酸调节pH到5.2。
加去离子水将溶液定容到100ml。 高温高压灭菌后,室温保存。
4、苯酚/氯仿/异戊醇
说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。 配制方法:将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
5、5M NaCl 配制量 1L
配制方法 称取292.2gNaCl置于1L 烧杯中,加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解 加去离子水将溶液定容到1L 后,适量分成小份 高温高压灭菌后,4℃保存。
6、0.5M EDTA 配制量 1L
配制方法 称取186.1g Na2EDTA.2H2O,置于1L 烧杯中。
加入约800mL的去离子水,充分搅拌。
用NaOH调节pH值至8.0(约20g NaOH)(注意:pH值至8.0时EDTA才能完全溶解)
加去离子水将溶液定容至1L。 适量分成小份后,高温高压灭菌。 室温保存。