2003-2004学年第二学期
01级生物技术《基因工程原理》试卷（A卷）
一、填空题（20分）
1. 基因工程的四大要素是 、 、 和 。
2．可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有 和 的活性。 3．乙醇沉淀DNA的原理是 。 4. 受体细胞的感受态是 。
5．在DNA分离过程中造成DNA分子断裂的因素主要有 、 和 。
6. 通常可在三种温度下保存DNA：4~5℃、-20℃、-70℃，其中以 最好。
7. Ⅱ类限制性内切核酸酶既具有 的专一性，又具有 的专一性。切割后产生 末端的DNA片段和 末端的DNA片段，作用时需要 作辅助因子。
8．Klenow大片段是用 切割DNA聚合酶Ⅰ得到的，它具有 和 两种活性。
二、单项选择题（20分）
1.1953年Watson和Crick提出：（ ）
（a） 多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋 （b） 三个连续的核苷酸代表一个遗传密码 （c） 遗传物质通常是DNA而非RNA
（d） 分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变
2. 在原核生物DNA复制中,以下哪种酶除去RNA引发体并加入脱氧核糖核苷酸（ ）
（a） DNA聚合酶Ⅲ （b） DNA聚合酶Ⅱ （c） DNA聚合酶Ⅰ （d） DNA连接酶 3.关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有（ ）不太恰当。 （a） 由作用于同一DNA序列的两种酶构成
（b） 这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
（c） 这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 （d） 不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统 4. Ⅱ型限制性内切核酸酶（ ）
（a） 有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列
（b） 仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 （c） 有外切核酸酶和甲基化酶活性
（d） 仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 5.T4 DNA连接酶是从T4噬菌体感染的E.coli中分离的，这种连接酶（ ） （a） 催化连接反应时既能以ATP又能以NAD作为能量来源 （b） 既能催化平末端连接又能催化黏性末端连接 （c） 是一种单肽酶，分子量为74kDa
（d） 既能催化单链DNA连接又能催化双链DNA连接 6. 从E.coli中分离的连接酶：（ ）
（a） 需要ATP作辅助因子 （b） 需要NAD作辅助因子 （c） 用于进行平末端的连接 （d） 作用时不需要模板 7. DNA连接酶的主要作用是在DNA复制、修复中封闭缺口，（ ）
′′
（a） 将双链DNA中的5-P同3-OH末端重新形成磷酸二脂键 （b） 作用时不消耗能量 （c） 需要Mn2+等二价辅助离子 （d） 也可以连接RNA分子
8. 松弛型质粒pUC载体系列不必进行氯霉素扩增，因为它们的拷贝数很高达到（ ） （a） 30-50 （b） 100-200 （c） 300-400 （d） 500-700 9. 第一个作为重组DNA载体的质粒是（ ）
（a） pBR322 （b） ColE1 （c） pSC101 （d） EcoB 10. 关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确？（ ） （a） 溶液Ⅰ的作用是悬浮菌体 （b） 溶液Ⅱ的作用是使DNA变性
（c） 溶液Ⅲ的作用是使DNA复性
（d） 质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性 11. Southern印迹的DNA探针（ ）杂交 （a） 只与完全相同的片段 （b） 可与任何含有相同序列的DNA片段 （c） 可与任何含有互补序列的DNA片段 （d） 可与用某些限制酶切成的DNA片段
12. 下列关于建立cDNA文库的叙述中，哪一项是错误的？（ ） （a） 特定组织或细胞中提取DNA或RNA
（b） 用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA （c） 以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA （d） 用S1核酸酶去除双链的发夹结构
13. 黏性末端连接法，不仅操作方便，而且（ ）
（a） 产生新切点 （b） 易于回收外源片段 （c） 载体不易环化 （d） 影响外源基因的表达
2
14. 关于噬菌斑筛选法的原理，下面哪一种说法不正确？（ ）
（a） 噬菌斑颜色的变化 （b） cI基因失活造成的噬菌斑的变化 （c） 对IPTG的分解能力 （d） 对Xgal的分解与否 15. 下列哪一种酶作用时需要引物？（ ）
（a） 限制酶 （b） 碱性磷酸酶 （c） 反转录酶 （d） DNA连接酶
16. 关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确？（ ） （a） 在不同的宿主中具有不同的复制机制 （b） 在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点 （c） 在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶 （d） 在不同的宿主细胞中具有不同的复制速度
17.下面关于多克隆位点（MCS）的描述，不正确的一句是（ ） （a） 仅位于质粒载体中 （b） 具有多种酶的识别序列
（c） 不同酶的识别序列可以有重叠 （d） 一般是人工合成后添加到载体中 18. cDNA文库包括该种生物的（ ）
（a） 某些蛋白质的结构基因 （b） 所有蛋白质的结构基因 （c） 所有结构基因 （d） 内含子和调控区
19. 同一种质粒DNA，电泳时，三种不同形式的迁移速度是（ ） （a） SC DNA＞L DNA＞OC DNA （b） SC DNA＞OC DNA＞L DNA （c） OC DNA＞SC DNA＞L DNA （d） L DNA＞SC DNA＞OC DNA 20. ColE1是用作基因工程载体的自然质粒，它不具有下列哪个性质（ ） （a） 是松弛复制型 （b） 具有四环素抗性 （c） 能被氯霉素扩增 （d） 产生大肠杆菌素
三、判断题（15分）
1．同一种限制性内切核酸酶切割靶DNA，得到的片段的两个末端都是相同的。
2．迄今发现的质粒DNA都是环状的。
3. 外源基因（或DNA片段）插入到某一基因内的位点后，这个基因不再有任何功能。
4. 核酸杂交探针就是带有放射性标记的DNA分子。
5. 通过原位菌落杂交得到的阳性克隆即是重组体，但不能判断插入的外源基因是否进行了表达。
6. 基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。
7. 用不同的产生粘性末端的限制性内切核酸酶分别切割载体和外源DNA片段，得到的粘性末端是不能通过末端互补而连接的。 8. 用免疫化学方法筛选的重组体不需要外源基因的表达。
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9. 甘油会使许多限制性内切酶的特异性发生改变，是导致一些酶星活性的主要原因之一，防止的办法是酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在5%以下。
10.不匹配的黏性末端可以通过部分填补后进行连接。
11.DNA聚合酶Ⅰ有三种酶活性，其中3’→5’外切核酸酶的活性在较多的dNTPs存在下，常被5’→3’合成酶的活性所掩盖。
12.基因组DNA文库是含有某一生物中全部DNA序列随机克隆的克隆群，而cDNA文库是含有某一生物中所有表达基因随机克隆的克隆群。 13.同聚物接尾法构建重组体，不仅连接效率高，而且也很容易回收插入的片段。
14.简并引物是根据已知DNA的序列设计的引物群。
15.一般情况下，质粒既可以整合到染色体上，也可以独立存在。
四、简答题（第1题3分，2～4题各4分）
1. 连接酶将Sau3AI（ GATC）切割的DNA与经BamHI（G GATCC）切割的DNA连接起来后，能够被BamHI切割的机率有多大（百分比表示）？ 2. 下面几种序列中你认为哪一个（哪些）最有可能是Ⅱ类酶的识别序列,
为什么？
GAATTC， AAGCTT， GAATCG， ACGGCA, CTGCAG。 3. 你打算扩增下图所示的两段序列之间的DNA，请从所列出的的引物中选出合适的一对。
5’-GACCTGTGGAAGC-------CATACGGGATTG-3’ 3’-CTGGACACCTTCG-------GTATGCCCTAAC-5’ 引物1：
（1）5’-GACCTGTGGAAGC （2）5’-CTGGACACCTTCG （3）5’-CGAAGGTGTCCAG （4）5’-GCTTCCACAGGTC 引物2：
（1）5’-CATACGGGATTG （2）5’-GTATGCCCTAAC （3）5’-GTTAGGGCATAC （4）5’-CAATCCCGTATG 4. 原核生物中有哪两种不同的转录终止机制？
五、问答题（30分）
1．PCR扩增的基本原理是什么？用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样信息？
2．黏性末端连接法是最常用的连接方法，具有许多优点，但是也有一些不足，请指出这些不足之处。
3．在DNA分离过程中，为何常常酚∶氯仿联用？
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2003-2004学年第二学期
01级生物技术《基因工程原理》试卷（B卷）
一、填空题（20分）
1. 基因工程的四大要素是 、 、 和 。
2．可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有 和 的活性。 3．乙醇沉淀DNA的原理是 。
4. 受体细胞的感受态是 。
5．在DNA分离过程中造成DNA分子断裂的因素主要有 、 和 。
6. 通常可在三种温度下保存DNA：4~5℃、-20℃、-70℃，其中以 最好。
7. 为了防止DNA的自身环化，可用 脱去双链DNA 。 8．Klenow大片段是用 切割DNA聚合酶Ⅰ得到的，它具有 和 两种活性。
9. 放射免疫筛选的原理基于以下三点： 、 和 。 二、单项选择题（20分）
1.1953年Watson和Crick提出：（ ）
（e） 多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋 （f） 三个连续的核苷酸代表一个遗传密码 （g） 遗传物质通常是DNA而非RNA
（h） 分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变
2. 在原核生物DNA复制中,以下哪种酶除去RNA引发体并加入脱氧核糖核苷酸（ ）
（a） DNA聚合酶Ⅲ （b） DNA聚合酶Ⅱ （c） DNA聚合酶Ⅰ （d） DNA连接酶 3.关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有（ ）不太恰当。 （e） 由作用于同一DNA序列的两种酶构成
（f） 这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
（g） 这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 （h） 不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统 4. Ⅱ型限制性内切核酸酶（ ）
（e） 有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列 （f） 仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供
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