a) 在溶剂和流速 页面,按如下设置:
1) 输入溶剂的比例。 2) 设置泵的运行时间。
Stroke Rate设置。 4) 输入泵的初始流速。
b) 在柱温设定
页面,按如下设置:
3) 对于典型的质谱流速 (50ul – 350ul) 在下拉菜单中选择 25 ul 为
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1) Temperature(℃) 设定柱温箱工作温度。
2) Temperature Limit(+/- ℃) 设定柱温箱温度允许范围。 3) High Pressure(Bar)
设定液相系统压力最高限,当系统压力超出范围
时,软件会自动停止泵的流速。
4) Pre-column Volume(选项) 输入系统滞后体积,对于2695系统,一般为
550ul,该参数只对梯度起作用。
c) 在
页面设定梯度表。
1) 设置梯度初始条件,按Insert Line编入梯度表,然后分别编辑、插入各项梯度条
件。 (curve 6是线性梯度变化)。
注意:梯度表的第一行的梯度曲线必须是Curve 1。
Insert Delete Delete Line Line Table 3. 如果你的液相色谱系统有样品加热和冷却装置,点击
样器吸样速度。
图标设定温度,并设定自动进
注意:自动进样器进样体积和瓶号不在这里设定,在样品表(Sample List)里编辑。
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4. 点击 设置 2996 二极管阵列检测器参数 。
a) Start Wavelength(nm) ,End Wavelength(nm) b) Resolution (nm)
波长采集范围
设定光谱分辨率,分辨率越高,数据量越大。通常,要看紫外光谱数
据时,光谱分辨率可以设到最高(1.2nm),如果只为了色谱定量,光谱分辨率可以设定到3.6nm或4.8nm,以减少数据量。同样,波长的采集范围也可以尽量缩小。 c) Sampling Rate
率。 d) Stop time
是指每个样品PDA的采集时间,这个时间一般应该与泵的运行时间和
质谱方法的数据采集时间一致。
e) 选择 Save to disk保证PDA数据被采集并存在电脑内。5. 选择 File – Save As 并输入液相方法的名称。 6. 点击状态
图标, 确认所有的状态灯是绿的。
将液相色谱通讯复
信号采集速率,采集速率越高,数据量越大。如果要保证对一个色谱
峰准确积分,通常这个色谱峰最少要有20个数据采集点拟和而成,以此来设定采集速
7. 如果液相通讯有问题,在液相方法编辑主菜单选择LC/
位。
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创建质谱方法
本单元介绍如何创建质谱采集方法。
1. 在Masslynx软件主界面点击质谱方法( MS Method )图标,界面。
进入质谱方法编辑
2. 创建全扫描方法(scan), 点击MS Scan图标 :
a. 输入需要扫描的质量数范围(Mass Range),过宽的质量扫描范围会减低灵敏度。
b. 输入质谱数据采集时间。
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c. 选择数据采集的方式,共有三种方式选择。
1. 对于产生单电荷的化合物,可以选择棒状图(Centroid )方式。 2. 对于产生多电荷的化合物,可以选择轮廓图(Continuum )方式。
d. 锥孔电压(Cone Voltage):
1. 如果希望能够得到分子离子峰,可以选择使用调谐窗口优化时所设置的条件,
。这时的锥孔电压会按照调谐窗口的设置执行。或者直
接在方法编辑窗口设定一个相对较低的锥孔电压。
2. 对于已经确定的分子离子峰,如果希望得到更多的碎片信息,可以选择使用较高的锥孔电压,(~ 40 – 70V)是一个较好的开始。
e. 设置扫描速率( Scan time),用你选择的质量数范围除以希望仪器所使用的扫描速率 (100-5000 DA/sec),即扫描速率
。虽然质谱的扫描速率可
以高达5000 DA/sec,但是使用过高的扫描速率,会造成较差的质谱分辨率及质量偏移,所以尽量将扫描速率控制在(500-1200DA/sec)之间。 f. 设定扫描间隔(Inter-scan Delay),一般设定为0.1 择正负离子同时扫描,扫描间隔要设为0.3。 g. 选择 OK,质谱条件将被列在表中。
h. 重复 a-e 步去建立多个正负离子扫描通道,最多可以建立32个采集通道,但过多的采集通道会降低灵敏度。
3. 创建选择离子采集模式,请选择 (SIR) 图标 模式有较高的灵敏度,用于定量计算。
,选择离子模式相对于全扫描
如果选
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