基因工程重点总结(3)

2019-08-20 19:37

4、提高淀粉合成酶—ADPG焦磷酸酶的活性。ADPG焦磷酸酶基因的应用提高糖原的积累速度进而提高淀粉的含量

5、延长叶片的光合作用功能期

哺乳动物细胞基因敲除实验基本过程

1、根据受体细胞核基因组中待敲除的目标基因之核苷酸序列的结构特征,在体外构成一种具有失活基因或纠正基因的DNA片段。然后将此片段克隆在一种具有选择标记基因的置换型基因定向插入载体上

2、将此载体经适当限制酶消化作用而被线性化之后,转染给培养的小鼠ES细胞。由于定向插入DNA片段的两侧与目标基因两端之间存在同源的DNA序列,因此,它课通过同源重组置换核基因组中的具功能活性的目标基因,也就是活把目标基因敲除掉 3、应用正负选择法分离出已成功地敲除掉了目标基因的ES细胞克隆,这样的ES细胞系也叫做突变的ES细胞

4、挑选生活力旺盛的突变的ES细胞,体外注射到超数排卵的供体小鼠的胚泡中。胚胎干细胞转移

5、将此胚泡转移到受体母鼠,亦称养母的子宫中。由此发育长成的当代转基因小鼠,其个体中含有一定比例的来自ES细胞的细胞群体,称为嵌合鼠。实验中所用的供体小鼠、受体小鼠和提供ES细胞的小鼠,三者均应是属于近交系

目的基因克隆策略: 1、图位克隆法

2、mRNA差异显示法(未知序列基因克隆) 3、基因组扣除杂交法(未知序列基因克隆) 4、转座子、T—DNA标签法 5、同源序列法 6、功能互补法


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