氨酸),Hyp(羟脯氨酸)。糖蛋白中寡糖与多肽链的,简称糖肽键。糖肽链的类型可以概况
为:
①N-糖苷键型:寡糖链(GlcNAC的β-羟基)与Asn的酰胺基、N-未端的a-氨基、Lys或Arg的W-氨基相连。
② O-糖苷键型:寡糖链(GalNAC的α-羟基)与Ser、Thr和羟基赖氨酸、羟脯氨酸的羟基相连。
③ S-糖苷键型:以半胱氨酸为连接点的糖肽键。
④ 酯糖苷键型:以天冬氨酸、谷氨酸的游离羧基为连接点。
63.将含有天冬氨酸(pI=2.98)、甘氨酸(pI=5.97)、亮氨酸(pI=6.53)和赖氨酸(pI=5.98)的柠檬酸缓冲液,加到预先同样缓冲液平衡过的强阳离交换树脂中,随后用爱缓冲液析脱此柱,并分别收集洗出液,这5种氨基酸将按什么次序洗脱下来?[Asp, Thr, Gly, Leu, Lys]
答:根据书中P156的图即可得出答案。在pH3左右,氨基酸与阳离子交换树脂之间的静电吸引的大小次序是碱性氨基酸(A2+)>中性氨基酸(A+)>酸性氨基酸(A0)。因此氨基酸的洗出顺序大体上是酸性氨基酸、中性氨基酸,最后是碱性氨基酸,由于氨基酸和树脂之间还存在疏水相互作用,所以其洗脱顺序为:Asp, Thr, Gly, Leu, Lys。
64.有一个A肽,经酸解分析得知为Lys、His、Asp、Glu2、Ala以及Val、Tyr和两个NH3分子组成。当A肽与FDNB试剂反应后得DNP-Asp;当用羧肽酶处理后得游离缬氨酸。如果我们在实验中将A肽用胰蛋白酶降解时,得到两种肽,其中一种(Lys、Asp、Glu、Ala、Tyr)在pH6.4时,净电荷为零,另一种(His、Glu以及Val)可给除DNP-His,在pH6.4时,带正电荷。此外,A肽用糜蛋白酶降解时,也得到两种肽,其中一种(Asp、Ala、Tyr)在pH6.4时全中性,另一种(Lys、His、Glu2以及Val)在pH6.4时带正电荷。问A肽的氨基酸序列如何?[Asn-Ala-Tyr-Glu-Lys-His-Gln-Val] 答:解:1、N-末端分析:FDNB法得:Asp-; 2、C-末端分析:羧肽酶法得:-Val;
3、胰蛋白酶只断裂赖氨酸或精氨酸残基的羧基形成的肽键,得到的是以Arg和Lys为C-末端残基的肽断。酸水解使Asn→Asp+ NH4+,由已知条件(Lys、Asp、Glu、Ala、Tyr)可得:Asn-( )-( )-( )-Lys-( )-( )-Val;
4、FDNB法分析N-末端得DNP-His,酸水解使Gln→Glu+NH4+由已知条件(His、Glu、Val)可得:Asn-( )-( )-( )-Lys-His-Gln-Val;
5、糜蛋白酶断裂Phe、Trp和Tyr等疏水氨基酸残基的羧基端肽键。由题,得到的一条肽(Asp、Ala、Tyr)结合(3)、(4)可得该肽的氨基酸序列为:Asn-Ala-Tyr-Glu-Lys-His-Gln-Val
65. 多聚甘氨酸的右手或左手α螺旋中哪一个比较稳定?为什么?
答:因为甘氨酸是在α-碳原子上呈对称的特殊氨基酸,因此可以预料多聚甘氨酸的左右手α螺旋(他们是对映体)在能量上是相当的,因而也是同等稳定的。
66.用下列表中数据确定此酶促反应:(1)无抑制剂和有抑制剂的Vmax和Km值。[无抑制剂时Km=1.1×10-5 molL-1,Vmax=50μmolL-1min-1,有抑制剂时:Km=3.1×10-5 molL-1,Vmax=50μmolL-1min-1](2)EI复合物的解理常数Ki。[Ki= 1.10×10-3molL-1] [S]/molL-1 V/μmolL-1min-1 无抑制剂 有抑制剂(2.0×10-3 molL-1) 0.3×10-5 10.4 4.1 0.5×10-5 14.5 6.4 1.0×10-5 22.5 11.5 3.0×10-5 33.8 22.6 9.0×10-5 40.5 33.8 解:(1)无抑制剂时:V=Vmax[S]/(Km+[S]),将表中数据代入此式可得Km=1.1×10-5 molL-1,Vmax=45.1μmolL-1min-1
对表中数据用V对[S]作图,求Km值,可判断有抑制剂时,Km值明显增大,故该抑制剂应为竞争性抑制剂。据V=Vmax[S]/(Km(1+[I]/Ki)+[S])以及Vmax不变的性质可得,此时Vmax=45.1μmolL-1min-1,Km=3.1×10-5 molL-1,Ki= 1.10×10-3molL-1
(1)竞争性抑制剂的米氏方程为:V=Vmax[S]/(Km(1+[I]/Ki)+[S]) (2)非竞争性抑制剂的米氏方程为:V=Vmax[S]/((Km+[S])(1+[I]/Ki)) 3)反竞争性抑制剂的米氏方程:V=Vmax[S]/(Km+[S](1+[I]/Ki))
67.肾营养不良(renal osleodystrophy)也叫肾软骨病,是和骨的广泛脱矿物质作用相联系的一种疾病,常发生在肾损伤的病人中。什么维生素涉及到肾的矿质化?为什么肾损伤引起脱矿物质作用?
答:1,25-二羟维生素D3能诱导钙结合蛋白(CaBP)的合成和促进Ca-ATP酶的活性,这都有利于Ca2+的吸收。它也能促进磷的吸收;促进钙盐的更新及新骨的生成;促进肾小管细胞对钙磷的重吸收,减少从尿中排出。1,25-二羟维生素D3的主要靶细胞是小肠粘膜、骨骼和肾小管,肾损伤将影响1,25-二羟维生素D3的作用,故会引起脱矿物质作用。 68.钙及肌醇三磷酸作用途径? 答:钙及肌醇三磷酸作用途径 激素通过结合到细胞表面的激素受体上,激活G蛋白,G蛋白再激活磷酸脂酶C,在磷酸脂酶C催化下,产生二脂酰甘油和肌醇三磷酸。二脂酰甘油进一步活化蛋白激酶C,促使靶蛋白质中的苏氨酸残基和丝氨酸残基磷酸化,最终改变一系列酶的活性;肌醇三磷酸则打开钙离子通道,使钙离子从内质网中释放到细胞质中,,而钙离子浓度的升高,可改变钙调蛋白的构象,钙调蛋白只有结合钙离子,形成Ca2+-CaM复合物,才具有生物活性。Ca2+-CaM复合物可以以两种方式调节代谢:1)直接与靶酶起作用;2)通过活化依赖Ca2+-CaM复合物的蛋白激酶起作用。