玉米种子纯度SSR分子标记鉴定方法-沈阳质量技术监督局(2)

2019-02-14 22:51

的SSR扩增体系以及反应条件进行PCR扩增。再将扩增的产物用3%琼脂糖电泳进行分离。观察父、母本以及其杂交种子的条带位置筛选特异性引物,筛选的结果显示,有26条引物在亲本之间表现为共显性分离,杂交种子的带型表现为双亲的互补。从中选出3个特异谱带在图谱中与其毗邻谱带相距较远、利于辨别的特异引物用以该品种的纯度鉴定。①1号种子纯度鉴定引物:QZSSR05 、QZSSR06、QZSSR14;②2号种子纯度鉴定引物:QZSSR08、QZSSR09 、QZSSR07;③3号种子纯度鉴定引物: QZSSR25、QZSSR26 、QZSSR07;④4号种子纯度鉴定引物:QZSSR31 、QZSSR07、QZSSR05;⑤5号种子纯度鉴定引物:QZSSR06 、QZSSR10、QZSSR03;部分鉴定结果可见附件中图2-7。

经过重复和比较最终确定带型清晰、稳定性好的引物作为检测杂交种纯度的特异引物。在共显性分离明显的SSR引物当中,5份种子分别选取一对特异性强条带清晰的引物采用分子标记和田间栽培的方式对100粒种子进行纯度鉴定。引物QZSSR05用于1号种子纯度鉴定;引物QZSSR08用于2号种子纯度鉴定;引物QZSSR25用于3号种子纯度鉴定;引物QZSSR31用于4号种子纯度鉴定;QZSSR06用于5号种子纯度鉴定。结果显示SSR技术鉴定种子纯度与田间鉴定方式的准确度都可能达到95%以上。本研究利用SSR分子标记的方法进行茄子种子纯度鉴定,结果表明在备选的33对引物中有26对引物可以对选取的5种茄子种子和亲本能够表现特异性明显的多态性,并且通过与田间检测的对比,准确度极高。应用这3种SSR引物可以实现检测的简易化、规范化和标准化。调查资料及检测结果也显示,此检测

方法有重复性好且操作简单等诸多优势,由此预见该检测技术的推广使用具有很大的社会经济效益。

四、国内外现行相关法律、法规和标准情况;

随着茄子杂种一代种植面积的不断扩大,品种的种子纯度问题显得尤其重要。在生产实践中,常常出现因种子纯度不高造成产量降低、品质变劣,商品性不好,严重影响经济效益。因此,大力开展茄子种子纯度检测工作显得尤其重要。目前,国内茄子纯度检测主要参考标准GB/T 3543.5-1995,该标准主要通过种子、幼苗、植株的形态上的差异来鉴定,时间长且准确度差。近年来,随着分子标记技术的不断发展和完善,基于DNA水平的茄子种子纯度检测工作得到长足发展,本标准采用SSR分子标记技术鉴定茄子种子纯度,在鉴定茄子种子纯度上有快速、准确、高效的优势,有利于检测技术的进一步推广应用。

五、重大意见分歧的处理结果和依据;

六、提出标准强制实施或推荐实施的建议和理由;

茄子种子纯度检测是种子管理部门、茄子种子生产单位、经营部门的日常业务和控制质量的关键环节之一。随着茄子杂种一代种植面积的不断扩大,品种的种子纯度问题显得尤其重要。在生产实践中,常常出现种子纯度不高、活力下降,造成产量降低、品质变劣,严重影响其经济效益。因此,大力开展茄子种子纯度检测工作显得尤其重要。本标准制定的茄子杂交种子纯度SSR分子标记鉴定技术规程操作

相对简便、结果稳定可靠、检测精准度高的技术方法,实用性强、适用性广,推荐有关单位和部门使用。

七、贯彻地方标准的要求、措施及标准实施时间的建议,强制性标准还应说明实施过渡期的理由;

由于标准中涉及的DNA提取技术、PCR技术、电泳技术专业性较强,操作者需具备一定的专业理论及掌握相关实验操作技术。因此,如条件允许,标准实施过渡期组织开展相关培训活动,提高检测人员的操作水平,使该标准得到推广应用。

八、其他应予说明的事项。 无

附件:

图1 应用CTAB提取方法提取的DNA

图2 部分PCR扩增结果

图3 引物QZSSR05对样品1的SSR扩增

图4 引物QZSSR08对样品2的SSR扩增

图5 引物QZSSR25对样品3的SSR扩增

图6 引物QZSSR31对样品4的SSR扩增

图7 引物QZSSR06对样品5的SSR扩增


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