5. 选择Add to Report自动把检测结果添加到当前报告中去,默认设置是把每个样品
都添加到报告中。要把样品数据保存到工作薄中,在检测前必须选上Add to report。 6. 选择Overlay spectra可以在同一时间显示多个光谱。
7. 使用合适的液体建立空白对照,空白对照液体是溶解目标分子的液体。空白对照
液体的pH值和离子浓度应和检测样品一样。
? 基座模式:取1-2ul空白对照加到基座上,放下检测臂,点击Blank键。
? 比色皿模式(仅ND2000c):插入比色皿时注意仪器上箭头指示方向。光束(2mm
宽)位置再比色皿底部以上8.5nm的位置,请按照比色皿生产厂家的建议加入液体。 注意:对于所有模式检测,检测臂都必须放下。在做基座检测前,要把比色皿拿出来了,这样可以保证检测臂放到正确的位置。
8. 在指定的位置输入样品名称,按上面检测空白对照的操作进行样品检测。 注意:每次检测的样品都必须是新加的。
检测后
? 使用干净的无尘纸擦干净上下基座,这样仪器就可以进行下一个样品检测了。 ? 当使用比色皿时,取出比色皿,彻底清洗比色皿并晾干。
Oligo Calc
Oligo Calc 用来计算特定核酸序列的分子量,消光系数,浓度因子和溶点。选择这个任务栏将显示两个键:
? Oligo Calc-用来输入感兴趣的序列,并选择合适的样品类型。
? Melting Point-显示DNA序列熔点的结算结果。这个功能键仅在DNA序列检测时
出现。
要使用Oligo Calc:
1. 使用如下方法来输入一个碱基序列: ? 使用碱基序列显示框下的按键。
? 键盘(仅仅能使用A,C,G,T,和U来输入碱基)
? 复制和粘贴一个序列到显示框(仅仅能使用A,C,G,T,和U来输入碱基) ? 清除碱基序列框中的序列,点击序列框右侧的Clear键,单个可以手动来删除。 2. 选择磷酸化程度,可以选择:DNA单磷酸化,RNA单磷酸化和三磷酸化。 3. 如果需要可以选择双链,互补的双链序列能够包括在计算中。 4. 在下拉框中,选择检测的核酸类型,默认的为DNA。 5. 如果要添加序列选择Modification并输入相关的分子量。
Oligo Calc分析结果区域包括:
分子量-显示碱基序列计算得到的分子量。
消光系数-显示260nm波长依赖的消光系数,单位是ng-cm/ml。 浓度因子-基于消光系数的常数,用来计算碱基序列的浓度。 碱基数-显示输入多少个碱基。 %GC-显示序列中的G/C含量。
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要计算DNA序列的熔点:
1. 按上面说明输入序列,如果序列已经输入到Oligo Calc Tab中,序列框中将自动计
算序列的熔点。
2. 按下列说明在框中输入合适的数值:
? Oligo Molarity-输入样品序列的摩尔浓度,默认的值为10um,但是可以根据不
同的样品更改。
? Cation Molarity-输入样品的阳离子浓度,默认的值为50um,但是可以根据不同
的样品更改。
? %Formamide-输入样品中的氨基浓度,默认值为0,但是可以根据不同的样品
更改。
熔点分析结果区域包括:
Salt Adjusted-计算序列的熔点,不考虑盐对相邻碱基的相互作用影响。 Nearest Neighbor-计算序列的熔点,考虑盐对相邻碱基的相互作用影响。
微阵列
总论
通过这个功能可以筛选有效的荧光标记杂交探针用于芯片试验,这样避免潜在的不好的探针,可以提高试验效率。NanoDrop 2000/2000c可以检测荧光染料的吸收光强度,最低可以检测0.2pmol/ul的荧光染料。软件可以自动应用相应的波长检测样品的吸光值。
检测浓度范围
NanoDrop 2000/2000c可以准确检测荧光染料标记的核酸浓度达:100pmol/ul的Cy3以及750ng/ul的DNA。
染料/发色团编辑
用户可以在NanoDrop 2000/2000c软件中选择预设好的染料,也可以使用染料/发色团编辑功能来添加新的染料。要添加一个新的染料,选择Show 栏(第一列),这将激活手动输入的区域,参照染料制造厂家的说明来填写合适的校准参数。当合适的染料被选择了,260nm的校准将被自动应用到核酸浓度计算中。当所有参数填写好后,保存这些信息。
要删除一个用户自定义的染料,点击左侧(+)键旁边的灰色框选择要删除的染料,然后点击键盘上的Delete键或者使用鼠标右键来删除。预编辑好的那些荧光染料,在编制栏是被锁定的,不能被删除。默认的设定是染料1是Cy3,染料2是Cy5。
独特的屏幕显示
右侧栏显示Micro Array应用独特的功能键,左侧任务栏上的功能键参考“Software Overview”的描述。
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光谱显示了当前样本在1nm光程下的数据,光程信息显示在Y轴。 右侧的光谱显示栏包括下列部分:
Sample ID-输入样品名称的区域。应在样品检测前输入样品名称。 Type-用户可以在下拉菜单中选择检测的核酸类型。选项包括:DNA-50用于检测DNA,RNA-40用于检测RNA,ssDNA-33用于检测单链DNA,其他选项还有Oligo DNA和Oligo RNA,可以根据不同的序列使用合适的消光系数。Custom选项可以输入消光系数的范围是15-150。
Conc-使用特定的消光系数和260nm波长下的吸光值来计算浓度。浓度单位可以在下拉框中选择。使用Beer定律来计算核酸浓度,可以参考“Nucleic Acid Calculations”。
A260-显示校准到10mm光程下的260nm波长下的吸光值。 注意:显示的A260值并不同于样品在260nm下的吸光值(以750nm波长为参比波长)。A260值在计算核酸浓度时考虑到染料对吸光值的影响,采用染料校准因子对检测结果进行了校准,吸光值校准采用选择的校准波长和750nm基线。从而显示的A260值和用来计算的核酸浓度的吸光值不一样。
260/280-260和280nm吸光值的比值。这个比值用来判定DNA和RNA的纯度。对于DNA来说比值为1.8时认为是纯的DNA,对于RNA来说比值为2.0时认为是纯的RNA。如果比值偏低,表明核酸中存在蛋白,酚或其他在280nm 处有吸光的杂质。 Dye1(2):选择染料,默认的选择是:染料1(Cy3),染料2(Cy5)。 ? Abs-每个染料在1mm光程下的吸光值。
? pmol/ul-基于每个荧光染料的消光系数计算出来的浓度,可以在下拉框中选
择浓度单位。
Analysis correction-在计算浓度前,减去参比波长下的吸光值。这仅仅影响报告的核酸浓度,默认的参比波长为340nm。
注意:对所有可见光检测,软件的校准波长为750nm,并自动以400nm和750nm吸光
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值为基线进行染料浓度计算。
进行微阵列检测
1. 在主菜单中选择Micro Array功能,如果显示了波长确认窗口,确保检测臂放下,
并点击OK。
2. 选择检测样品的类型,默认的设定为ssDNA-33。 3. 在下列框中选择浓度单位,默认的单位是ng/ul.
4. 使用染料1或者染料2后面的下拉框来选择染料,默认的染料设定:染料1(Cy3),
染料2(Cy5),如果仅标记了一个染料,在染料2类型上选择None。
5. 默认以340nm的吸光值为核酸校准值。通过取消选择Analysis correction框来选择
或者不选择参比波长校准。
? 在文件下拉条中选择Use current settings as default,这是一个便捷的方法来限定
每个心工作薄的设定时间。
6. 选择Add to report来自动把当前检测的结果添加到报告中去。默认的设定是把所
有的报告添加到报告中。为了把一个检测结果保存到工作薄中,必须在检测前把Add to report选择上。
7. 选择Overlay spectra 来同时显示多个光谱图。 8. 使用合适的buffer来检测空白对照:
? 基座模式:取1-2ul空白溶液加到基座上,放下检测臂并点击Blank。
? 比色皿模式(仅2000c):按照比色皿生产厂家的建议加入适量的空白溶液,
按照仪器上标记的光路放心,插入比色皿。
注意:用任何模式检测时检测臂都必须放下,在用基座检测时,建议把比色皿从仪器上取出,以保证检测臂放到合适的位置。
9. 输入样品名称,按做空白一样加入样品点击Measure开始检测。
注意:每次检测的样品必须是新鲜加入的!
检测以后:
? 用干净的无尘纸擦拭干净上下基座,这样仪器就可以进行下一个样品的检测了。 ? 当使用比色皿模式时,取出比色皿,彻底清洗干净然后再进行下一个样品检测。
Oligo Calc
Oligo Calc软件功能可以用来计算特定核酸序列的分子量,消光系数,浓度因子和熔点。选择这个任务栏:
? Oligo Calc-用来输入感兴趣的序列并选择合适的样品类型。
? Melting Point-显示了DNA链计算的熔点,这个功能只有在DNA序列上有效。
要使用Oligo Calc:
1. 使用下列的方法来输入碱基序列: ? 碱基序列显示框下面的按键。
? 键盘(仅使用A,C,G,T和U来输入序列) ? 复制和粘贴序列。
? 要清楚碱基序列,点击显示框右边的Clear键。单个碱基可以使用手动来删除。
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2. 选择磷酸化程度,可以选择:单磷酸化(DNA),单,双或者三磷酸化(RNA). 3. 可以选择双链,在计算时可以自动包含其互补的链序列。 4. 在下列菜单中,选择分析的核酸类型,默认的为DNA。 5. 对于额外的碱基序列,选择Modification并输入分子量。
Oligo Calc试验结果区域包括:
分子量-显示计算的碱基序列的分子量。
消光系数-显示260nm 处的消光系数,单位ng-cm/ul。 浓度因子-恒数,基于消光系数来计算检测序列的浓度。 碱基数-显示输入了多少个碱基。 %GC-显示序列的GC含量。
要计算DNA序列的熔点:
1. 按上面描述的方法输入序列。
注意:如果一个碱基序列已经输入到Oligo Calc中,熔点框的碱基序列框将自动输入那个序列。
2. 在每个框中输入合适的的数据:
? Oligo Molarity-输入样品的摩尔浓度,默认的值为10uM,可以针对样品更改
为更合适的数据。
? Cation Molarity-输入样品的阳离子浓度,默认的值为50mM,可以针对样品
更改为更合适的数据。
? %Formamide-输入样品中的甲酰氨浓度,默认的值为0,可以针对样品更改
为更合适的数据。
熔点分析结果包括:
Salt-Adjusted-计算序列的熔点而不考虑相邻碱基序列的干扰。
Nearest-Neighbor-显示序列的熔点同时考虑相邻碱基序列的干扰。
UV-VIS
总论
UV-VIS功能使NanoDrop 2000/2000c可以想普通的紫外-可见分光光度计一样行使功能。可以显示从190到840nm的样品的吸光值。最多可以同时指定检测40个波长下的吸光值并把数据显示在报告中。
检测浓度范围
在使用自动光程模式下,NanoDrop 2000/2000c能够检测相当于10mm光程下300A的吸光值。
独特的屏幕特征
右侧栏显示UV-VIS独有的特征,左侧任务栏的说明参见“Software Overview”。
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