陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第35页共99页 6. 结果判定 .6.1临界值(CUTOFF)计算：临界值=阴性对照孔A均值NC×2.8 阴性对照OD均值大于0.08或阳性对照小于等于0.5时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。 6.2结果判定：样品OD值S/C.O. <1者为HCV阴性。 样品OD 值S/C.O.≥1者为HCV阳性。 7. 标本： 7.1静脉抽取空腹患者标本3.0mL（真空采血管），将血液放置在37℃水浴中30分钟后，分离血清。 7.2 溶血标本不能用于检测。 7.3 用完的标本，应在样品管上注明日期，放置在2—8℃冰箱中保存一周。 7.4 样品放置一周后，逐管加入1：50的84消毒液，并放置4小时后，装入医疗垃圾袋由医院专人按医疗垃圾处理。 8. 注意事项 8.1 试剂盒从冷藏环境中取出时应置室温平衡 15-30分钟后方可使用,未用完的微孔条用自封袋密封2-8℃保存,温育酶标板的时间和温度必须严格控制. 8.2 加试剂前，应先将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。加液时使用移液器加,并经常校对移液器的准确性.，避免加样时在孔中产生气泡。 8.3 洗涤时各孔均需加满洗液,防止孔口内有游离酶不能洗净.使用洗板机洗涤应设定30-60秒浸泡时间. 8.4 HCV抗体检测结果的判定必须以酶标仪读书为准,使用双波长450/630nm检测时,可不设空白对照. 8.5 所有样品和废弃物都应按传染源处理,终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全. 8.6 操作应按说明书严格进行,有效期内使用,封板膜为一次性用品不能重复使用. 8.7 操作过程中禁止酶标板及其它试剂、次氯酸类消毒剂接触。 8.8洗板机在使用结束后要使用新鲜蒸馏水或高品质去离子水冲洗干净，以防止管路阻塞和腐蚀。 8.9终止后请尽早用酶标仪进行读数测量。样本的检测读值与样本中抗体的浓度不一定呈正相关关系。 8.10不同厂商、不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第36页共99页 （四）梅毒螺旋体抗体（AntT—TP） 1. 检验目的：用于检测血清或血浆标本中的梅毒螺旋体。 2. 检测原理：本试剂为又对抗原夹心ELTSA方法，时机盒中所用色被抗原和酶标记抗原
基因工程表达的煤毒螺旋体特异性抗原，显色剂为TMB。 3. 试剂：英科新创（厦门）科技有限公司。 3.1 TP酶标板 （96人份） 3.7显色液B 1瓶 3.2 TP阳性对照 1管 3.8 终止液 1瓶 3.3阴性对照 1管 3.9自封袋 1个 3.4TP酶试剂 1管 3.10 封板膜 3张 3.5浓缩洗涤液 1瓶 3.11说明书 1份 3.6显色液A 1瓶 4. 操作： 4.1配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。 4.2编号：将酶标板条固定于板架上，设阳性对照1孔,阴性对照1孔，空白对照1孔(空白孔不加样品及每试剂,其余各步相同)。 4.3加样：分别在相应孔中加入待测样品100ul,阴、阳性对照各加入100ul震荡混匀。 4.4温育：置37℃温育60分钟。 4.5 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干。 4.6 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体100uL；轻拍混匀。 4.7 温育：置37℃温育30分钟。 4.8 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干。 4.9 显色：每孔加显色剂A、B各50uL，轻拍混匀，置37℃暗置30分钟。 4.10 终止：每孔加入终止液50uL轻轻振荡混匀 4.11测定：用酶标仪单波长450nm或双波长630nm测定各孔OD值(建议用双波长测定，用单波长测定时需用空白对照孔调零)并记录结果。 5.结果判定 .5.1临界值(CUTOFF)计算：临界值=阴性对照孔A均值NC×2.8 阴性对照OD均值大于0.08或阳性对照小于等于0.5时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。 5.2结果判定：样品OD值S/C.O. <1者为TP阴性。 样品OD 值S/C.O.≥1者为TP阳性。： 制定人 修改人 审核人 批准人 批准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第37页共99页 6. 标本： 6.1静脉抽取空腹患者标本3.0mL（真空采血管），将血液放置在37℃水浴中30分钟后，分离血清。 6.2 溶血标本不能用于检测。 6.3 用完的标本，应在样品管上注明日期，放置在2—8℃冰箱中保存一周。 6.4 样品放置一周后，逐管加入1：50的84消毒液，并放置4小时后，装入医疗垃圾袋由医院专人按医疗垃圾处理。 7. 注意事项 7.1 试剂盒从冷藏环境中取出时应置室温平衡 15-30分钟后方可使用,未用完的微孔条用自封袋密封2-8℃保存,温育酶标板的时间和温度必须严格控制. 7.2 加试剂前，应先将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。加液时使用移液器加,并经常校对移液器的准确性.，避免加样时在孔中产生气泡。 7.3 洗涤时各孔均需加满洗液,防止孔口内有游离酶不能洗净.使用洗板机洗涤应设定30-60秒浸泡时间. 7.4 HCV抗体检测结果的判定必须以酶标仪读书为准,使用双波长450/630nm检测时,可不设空白对照. 7.5 所有样品和废弃物都应按传染源处理,终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全. 7.6 操作应按说明书严格进行,有效期内使用,封板膜为一次性用品不能重复使用. 7.7 操作过程中禁止酶标板及其它试剂、次氯酸类消毒剂接触。 7.8洗板机在使用结束后要使用新鲜蒸馏水或高品质去离子水冲洗干净，以防止管路阻塞和腐蚀。 7.9终止后请尽早用酶标仪进行读数测量。样本的检测读值与样本中抗体的浓度不一定呈正相关关系。 7.10不同厂商、不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。 制定人 修改人 审核人 批准人 期准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第38页共99页 （五）肺炎支原体（IgM、IgG） 1.预期用途：肺炎支原体肺炎是由支原体感染引起的呼吸道和肺部的急性炎症改变。该试剂盒采用金标免疫渗滤分析原理定性测定人血清中的肺炎支原体（IgM、IgG）抗体。 2.检验原理： 2.1肺炎支原体IgM：本试剂盒应用纯化肺炎支原体特异性抗原和单克隆抗体，结合金标免疫渗滤实验原理，以间接法检测血清中的MP- IgM抗体。 2.2肺炎支原体IgG：本试剂盒依据间接法免疫测定原理，以胶体金粒子作为标记示踪物，结合金标免疫渗滤试验原理，测定血清标本中的肺炎支原体抗体。先将特异性MP抗原固相化于硝酸纤维素膜上，当血清标本根据渗滤作用通过硝酸纤维素膜时，其中的MP抗体便与膜上的固相抗原发生特异性结合形成复合物，而其他无关物质则被滤过，再加上金标记抗人IgG单克隆抗体，滤过时便与复合物结合，形成肉眼即可方便观察的红色印迹。 3.试剂：潍坊市康华生物技术有限公司。 3.1检测板 20块 3.3洗涤液 1X5.0ml 3.2金标液 1X3.5ml 3.4说明书 1份 4.储存条件及有效期： 4.1.试剂盒置2-8℃冷藏，有效期为10个月。 4.2试剂盒可短期常温运输。寒冬或炎夏季节应采用相应防护措施，避免冻融或长期高温。 5.样本要求 5.1必需使用新鲜血清或2-8℃放置3天内的血清测定。 5.2特殊情况下标本无法及时检测，应于-20℃以下保存。任何标本在临用前均须充分离心后取澄清液体部分检测。 6检验方法： 6.1肺炎支原体IgM：1）、取出试剂盒，室温平衡20-30分钟； 2）、滴加洗涤液2滴于反应孔中，待液体将膜完全湿润； 3）、加待测血清50 ul（若用样品吸管则加2滴）于反应孔中，待液体充分吸入； 4）滴加洗涤液2滴于反应孔中，待液体充分吸入； 5）滴加金标液3滴于反应孔中，待液体充分吸入； 6）滴加洗涤液3滴于反应孔中，待液体充分吸入后于3分钟内观察结果。 制定人 修改人 审核人 批准人 期准日期 陕西省水电医院检验科 免疫室SOP文件 责任部门：检验科 文件编号:SDYYJYK-SOP-MY1 版序：001 时间：2015-01-01 页码：第39页共99页 6.2肺炎支原体IgG：1）、取出试剂盒，室温平衡20-30分钟； 2）、滴加洗涤液1滴于反应孔中，待液体将膜完全湿润 3）、加待测血清150 ul（若用样品吸管则加2滴）于反应孔中，待液4）、5）滴加金标液3滴于反应孔中，待液体充分吸入； 6）滴加洗涤液3滴于反应孔中，待液体充分吸入后于3分钟内观察 体充分吸入； 结果。 7.检验结果的解释： 7.1阴性-质控点C显示红色，检测点T位置无红点出现； 7.2阳性-质控点C显示红色，检测点T位置有红点出现； 7.3无效-质控点C不显色即表明操作失误或试剂失效。 8检验方法的局限性：. 8.1本试剂盒与所有定性检测试剂一样，只用于筛选试验。 8.2感染时间短或处于窗口期的标本，由于其抗体还不存在或太低，用本试剂盒检测会出现阴性结果。 8.3个别免疫受抑制抗体或免疫亢进个体其检测结果会有差异。 8.4本试剂盒不能确定（MP-IgM、MP-IgG）抗体的确切含量。 8.5本试剂为定性检测试剂，任何检测结果均需要与临床信息联系来综合判定。 9.注意事项： 9.1必须使用新鲜血清或2-8℃放置3天内的血清测定。少数标本（高脂血、高胆红素、溶血）背景轻微偏深，一般不影响结果判定。 9.2加有抗凝剂、促凝剂的标本渗滤速度缓慢，底色太红，影响结果判读，建议不使用。 9.3加液体的各步操作之间不得有时间间隔；同一步骤中所加液体应迅速一次加入后等其渗入。 9.4超过规定时间出现的结果无效。 9.5质控点的强弱并不代表试剂质量的优劣，只要其显色清楚可见，即表明试剂有效。 9.6不同产品、同产品不同批次之间的金标液、洗涤液严禁混用。 制定人 修改人 审核人 批准人 期准日期