精取葡萄糖对照液0.1，0.2 ，0.3， 0.4，0.5 ，0.6.，0.7 ml，分别置于量瓶中，加蒸馏水使成2.0 ml，各加苯酚试剂1.0 ml，在旋转混匀器上摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0 ml，摇匀，放置5 min，置沸水浴中加热15 min，冷水迅速冷却至室温。另以蒸馏水2.0 ml同法操作，作为空白对照，在490 nm处测其吸光度。
2.3 多糖提取参照李满飞［5］方法改良，精密称取各石斛干燥后粗粉10 g ，加入石油醚（60～90℃）50 ml，回流提取1 h脱脂。过滤，挥干溶媒，以80％乙醇回流提取1 h（提取分离干扰组分），趁热过滤，挥干溶媒，加入蒸馏水250 ml回流提取2次，1 h/次，趁热过滤，减压浓缩至30 ml，用0.1％活性炭脱色，过滤，加入95％乙醇使溶液含醇80％，静置过夜，分出沉淀物溶于蒸馏水，Sevag法脱蛋白。上清液如上述醇沉，沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤。将沉淀再如上脱色、醇沉，得到多糖精制品于60℃烘干备用。
2.4 换算因素精确称取60℃干燥至恒重的石斛多糖精制品各10 mg，分别置于100 ml量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，作为储备液。分别精取多糖储备液0.3 ml，按照标准曲线制备的方法操作，测定吸收度。另精取葡萄糖标准溶液0.3ml（含葡萄糖30 μg），同法操作，求出石斛多糖溶液中的葡萄糖含量，按下式计算换算因素,F= 多糖浓度（μg·ml-1）/多糖溶液的葡萄糖含量（μg·ml-1）×稀释倍数。
2.5 样品多糖测定精密称取60℃恒重的各石斛粗粉0.5 g，置圆底烧瓶，用石油醚（60～90℃）脱脂1 h，加入80％乙醇100 ml回流提取1 h，趁热过滤。药渣用80％热乙醇8 ml洗涤3次，再用85 ml蒸馏水回流提取1 h，趁热过滤，用热水洗涤药渣和烧瓶，冷却后在250 ml量瓶中以水定容。分别精取0.3 ml，按标准曲线项下操作，按下式计算样品中多糖的含量。多糖含量（％）＝Cs·D·F·V/ W。式中：Cs为供试品溶液中葡萄糖浓度（μg·ml-1），D为供试品溶液的稀释因素，F为换算因素，V为供试品的体积（ml），W为供试品的质量（mg）。
3 结果
3.1 折干率铁皮石斛（两次采集）和齿瓣石斛的折干率见表1～2。表1 铁皮石斛折干率（略）表2 齿瓣石斛折干率（略）
3.2 线性关系与线性范围依据方法“2.2”项绘成标准曲线,得回归方程: Y=-0.001 47+ 0.074 45X，r=0.998 4,说明在5.00～35.00 μg间的线性较好。
3.3 换算因素石斛中多糖成分比较复杂,将其分解成单糖分子后再根据单糖的含量换算出石斛多糖的含量。根据实验数据计算出铁皮石斛及齿瓣石斛的换算因素F值见表3。表3 铁皮石斛及齿瓣石斛换算因素（略）
3.4 多糖含量采用硫酸-苯酚比色法测定石斛多糖的含量。每一种铁皮石斛及齿瓣石斛样品各取5个样品，分别编为1，2，3，4，5号，每个各取3份，对处理后的每份多糖供试液分别平行测定3次，取浓度的平均值计算多糖含量。结果见表4。表4 铁皮石斛及齿瓣石斛多糖含量（略）
4 讨论
有文献报道，铁皮石斛的多糖含量约为22%［6，7］。本实验中，冬末采收的铁皮石斛的多糖含量及折干率（20.29%，20.16%）高于秋末采收的铁皮石斛（14.86%，16.9%），因此选择冬末作为铁皮石斛的采收季节较为适宜。在相同栽培条件下，1号样品多糖含量（22.27%）与4号样品多糖含量（17.75%）的最大差值为4.52%，而1号样品折干率（22.1%） 与5号样品折干率（17.0%）之间最大差值5.1%，由此可推断，不同栽培类型铁皮石斛之间品质存在一定的差异。
李满飞等［5］报道了用比色法测定石斛多糖时测定了齿瓣石斛，其多糖含量为21．09％。本实验结果表明，作为铁皮石斛替代品的齿瓣石斛的平均多糖含量及折干率（16.93%,18.92%）与铁皮石斛（20.29%，20.16%）差异不大，其野生苗的多糖含量及折干率（17.91%，19.26%）均高于组培苗（15.47%，18.4%），因此选择野生苗作为药用更为适宜。