3?氨基丙基三乙氧基硅烷(APS，98%, Alfa Aesar公司）；葡萄糖氧化酶(GOD，120 U/mg，Sigma公司）；标准葡萄糖储备液，放置过夜后使用，保存于4 ℃冰箱中。鲁米诺(＞98%，Fluka公司）; 戊二醛(25%，上海化学试剂厂）；其它试剂均为分析纯。实验用水为二次蒸馏水(18.2 MΩ·cm)。
2.2 酶传感器的制作
2.2.1 固体石蜡碳糊电极的制作
参考文献[1３]，取3 cm长的铁棒(外径 2.55 mm)和2 cm长的玻璃管(3.0 mm i.d)，磨平铁棒和玻璃管的两端，用水洗净。按一定比例混合固体石蜡和碳粉，加热熔化石蜡，均匀搅拌，制得石蜡碳糊。把铁棒插入玻璃管中距底部约0.5 mm，形成一个凹坑，趁热将石蜡碳糊封装进此凹坑，填平，冷却，除去玻璃壁外的沾粘的碳糊，并在光滑打印纸抛光电极表面。然后分别用HNO3（1∶1， V/V）、无水乙醇和二次蒸馏水清洗电极。在1.0 mol/L H2SO4溶液中采用循环伏安（CV）法活化作为工作电极的SPCE，扫描范围1.2～－1.2 V。再于5 mmol/L K3Fe(CN)6溶液中循环扫描，扫描范围改为0.5～－0.2 V。重复上述步骤直至得到峰形良好的一对可逆氧化还原峰。
2.2.2 磁性纳米粒子的制备、氨基化和葡萄糖氧化酶修饰
按照n(Fe2+)∶n(Fe3+) = 1∶1.75称取适量FeCl3·6H2O和FeSO4·7H2O，溶于水中。搅拌下快速加入适量 2.0 mol/L NaOH溶液，调pH值至11.0，室温下搅拌0.5 h，迅速升温到75 ℃，熟化0.5 h，整个过程都在氮气的保护下进行，得黑色悬浮液。超声15 min，磁铁分离不溶物，用水洗涤至溶液呈中性。在75 ℃下真空干燥，得粉末，4 ℃下密闭保存在。
取20 mL乙醇，加入50 mg Fe3O4纳米粒子粉末，超声分散，之后加入0.2 mL 3?氨基丙基三乙氧基硅烷（98%），在氮气的保护下，25 ℃搅拌12 h制得氨基化的磁性纳米粒子，用无水乙醇、水超声清洗后定容至20 mL备用。
取2.0 mL上述溶液于5 mL试管中，晾干，再于试管中加入2.0 mL 0.25%戊二醛，混旋30 s后，放入4 ℃冰箱冷藏1 h，之后水洗并晾干，再加20 g/L GOD溶液2.0 mL，于4 ℃冰箱中保存12 h，制得GOD修饰的磁性粒子溶液（GOD/ Fe3O4）。图1为磁性纳米粒子固定葡萄糖氧化酶的示意图。
2.2.3 自组装磁性纳米复合粒子修饰电极
SPCE电极面朝上，用磁铁吸住电极上端铁芯，滴加15 μL GOD/Fe3O4粒子在电极表面，制得酶修饰电极（GOD/Fe3O4/SPCE/CME）。测定时将电极面对准光电倍增管检测方向。每次更新电极时，移去磁铁，水洗去磁性复合粒子，之后重复上述过程以更新电极。
2.3 ECL传感器原理和实验方法
ECL传感器的原理如图2。GOD/Fe3O4复合磁性纳米粒子通过外加磁场而修饰在SPCE电极表面。此时，溶液中的葡萄糖与溶解氧发生GOD酶促反应，生成H2O2。同时，溶液中的鲁米诺在修饰电极表面发生氧化，鲁米诺氧化物与H2O2发生ECL反应。GOD/Fe3O4复合磁性纳米粒子的存在促进了鲁米诺的氧化和H2O2生成。在本实验中，室温下，将10 mL含一定浓度的葡萄糖的0.5 mmol/L鲁米诺? 0.1 mol/L硼酸钠缓冲溶液(pH=8.0)转至石英烧杯中，然后采用三电极系统进行测试，并测定ECL的强度。扫描范围为0.2～1.4 V(vs. SCE)，扫速为50 mV/s。光电倍增管高压600 V，采样速率10 T/S，放大倍数3，测量时间60 s。SPCE不用时置于冰箱中4 ℃下保存。
３ 结果与讨论
3.1 Fe3O4纳米粒子的表征
３．１．１ Fe3O4纳米粒子粒度分析
用激光散射仪（英国Malvern公司）测定Fe3O4纳米粒子粒径。从图3可见，本实验所制备的Fe3O4磁性粒子粒径主要分布在12～22 nm之间。说明磁性纳米粒子已经达到纳米级，且粒径分布较为集中，因此，可用于后续实验。