1.3 细胞培养小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7细胞购自武汉大学细胞库(中国典型培养物保藏中心CCTCC)，在37℃，5% CO2条件下，用含10% FBS、1%双抗的DMEM培养基传代培养［3］，实验用细胞均处于指数生长期。
1.4 维药罗勒5个提取部位的给药浓度的筛选用含10%FBS的DMEM培养基将OBL-乙醇总提取物、OBL-石油醚，OBL-氯仿，OBL-醋酸乙酯，OBL-正丁醇溶液分别稀释成196.50，114.5，396，650，359μg·ml-1，每种药物再分别以2倍进行4次倍比稀释，得到5种不同浓度梯度的药物。
取对数生长期的RAW264.7细胞，消化离心后，用含10%FBS的DMEM培养基稀释成浓度为1×105个·ml-1，以每孔200μl接种到96孔培养板中，置37℃、5% CO2培养箱中培养24 h后，吸弃孔内液体，分别以每孔200μl加入配制好的5种不同浓度的药物，设置1% DMSO溶媒对照组及正常对照组，每组设3复孔，置37℃、5% CO2培养箱中培养24 h，吸弃孔内液体，用PBS洗1次，换成每孔180μl的无血清培养基，每孔加入20μl 5 mg·ml-1的MTT溶液，37℃避光温育4 h，吸弃孔内液体，每孔加入150 μl DMSO，490 nm波长下测其OD值，计算细胞抑制率，确定各药的半数抑制浓度(IC50)。
1.5 维药罗勒5个提取部位的不同时间细胞药物干预对COX-2酶活性的影响
1.5.1 短时间干预对COX-2酶活性的影响参照文献［4］，略改动。将指数生长期的RAW264.7细胞按1×105个·ml-1接种于96孔培养板中，每孔200 μl，设溶剂DMSO对照组、LPS处理组、阳性药物吲哚美辛对照组及不同浓度的各部位药处理组，每组3复孔，于37℃，5% CO2培养24 h。更换培养基后，加入LPS(终质量浓度为2 mg·L-1)培养8 h (溶剂DMSO对照组不加LPS)，弃去旧培养基，用新鲜培养基洗涤两次，分别加入各组药物(溶剂DMSO对照组和LPS处理组加入0.5% DMSO)，孵育30 min，加入底物AA(终浓度为10 μmol·L-1)，37℃孵育30 min，收集细胞上清液，-20℃冻存待测。用MTT法检测活细胞数目，ELISA法测定上清液中PGE2浓度。
1.5.2 长时间干预对COX-2酶活性的影响所设组别同短时间干预对COX-2酶活性的影响，分别在RAW264.7细胞中加入各组干预药物预孵育30 min(溶剂DMSO对照组和LPS处理组加入0.5% DMSO)，再分别加入终质量浓度为2 mg·L-1的LPS(溶剂DMSO对照组除外)，继续在37℃，5% CO2培养箱中培养24 h后取出，加入底物AA(终浓度为10 μmol·L-1)，37℃孵育30 min，收集细胞上清液，-20℃冻存待测。用MTT法检测活细胞数目，ELISA法测定上清液中PGE2浓度。
1.6 统计学处理数据用SPSS统计软件处理，所有结果用±s表示，采用方差分析和SNK两两比较，P<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 维药罗勒5个提取部位的给药浓度的筛选由图1可看出，极性较大的OBL-正丁醇及OBL-乙醇总提取物对RAW264.7细胞的IC50值最大，对细胞的毒性较小；而OBL-氯仿的IC50值最小，对细胞有较大的毒性。后面的实验所采用的浓度均确保各部位药对细胞无毒性作用。
2.2 短时间干预对COX-2酶活性的影响MTT结果显示，与LPS处理组比较，各组细胞数均无统计学差异（P>0.05），表明各药对细胞均无毒性作用。
由表1得出，短时间药物干预后，维药罗勒各部位对PGE2均有抑制作用（P<0.05），其中醋酸乙酯及正丁醇部位对PGE2有较大的抑制作用。表明维药罗勒可直接抑制COX-2酶活性，醋酸乙酯及正丁醇部位是其有效部位群。表1 维药罗勒不同提取部位短时间干预对COX-2酶活性的影响（略）
2.3 长时间干预对COX-2酶活性的影响 MTT结果显示，与LPS处理组比较，各组细胞数均无统计学差异（P>0.05），表明各药对细胞均无毒性作用。