作者：李正言，翟延君，滕 宇，伍伟超
【摘要】 目的测定柘木药材中双指标成分槲皮素与山萘酚的含量，为柘木商品药材的质量控制提供方法。方法采用高效液相色谱法，以槲皮素和山萘酚为指标，对购自广西不同商品柘木药材进行含量测定。结果不同商品柘木中槲皮素和山萘酚的含量有显著差异。结论实验方法简便、快速、准确，可为鉴定柘木的药用部位和控制柘木药材的质量提供参考。
【关键词】 柘木; 槲皮素; 山柰酚; 高效液相色谱法
柘木为桑科植物柘树Cudrania tricuspidata(Carr.)Bur.的干燥根及木材[1]。柘木始载于《本草拾遗》，1977年版《中国药典》曾将柘树的根收载于穿破石项下[2]，是我国传统的中药材。柘树广泛分布于我国的华南、华东、西南以及河北以南地区。民间多用柘木的水煎液治疗消化系统的癌症[3]，能明显改善病人生活质量，延长生存期。柘木糖浆作为消化系统癌症治疗中的辅助治疗药物具有较好的临床疗效。文献报道柘木中含有黄酮、生物碱及多糖等多种成分，现代药理研究证明黄酮类成分具有体外抗肿瘤的作用[4]。本实验采用HPLC法，以槲皮素和山萘酚为指标，对购自广西不同商品的柘木药材进行了含量测定，通过双指标成分含量来评价柘木商品药材的质量和鉴定药用部位，为柘木商品药材的质量控制提供参考。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent 1100液相色谱仪;DAD检测器;电子天平(上海天平仪器厂);KQ-250型超声清洗器(昆山超声仪器有限公司)。
1.2 试药实验所用药材购于广西各地，经广西中医学院中药鉴定教研室廖月葵老师鉴定为桑科柘属植物柘树Cudrania tricuspidata(Carr.)Bur.的干燥根及木材。槲皮素(批号: 10129905)、山萘酚(批号:1108612200303)购自中国药品生物制品检定所;甲醇为色谱纯(天津科密欧公司);水为亚沸纯化水、磷酸、盐酸为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱为Dikma Diamonsil-C18，(5 μm，200 mm×4.6 mm);流动相为甲醇-0.1%磷酸水(48∶52);检测波长365 nm;体积流量: 1 ml·min-1。理论塔板数按槲皮素和山萘酚峰计均大于5 000。见图1。
a. 对照品 b. 供试品 1-槲皮素 2-山萘酚
图1 高效液相色谱图
2.2 供试品溶液的制备 精密称取柘木药材粉末(过60目筛)2 g，置于50 ml圆底烧瓶中，加甲醇25 ml，称重，回流提取2 h，冷却，补足失重，过滤，精密移取续滤液10 ml，加入25%的盐酸10 ml，水浴回流水解30 min，快速冷却，转移至25 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，取样，过滤，作为供试品溶液。
2.3 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照品5.10 mg、山萘酚对照品5.05 mg, 各加甲醇溶解定容至25 ml，作为贮存溶液。各取5 ml按1∶1混合后，定容至25 ml容量瓶中，配成混合对照品溶液，浓度分别为40.8 μg·ml-1和40.4 μg·ml-1。
2.4 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液(槲皮素和山萘酚)1，2，3，4，5，6 μl注入高效液相色谱仪中，以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标进行回归，得标准曲线回归方程。槲皮素： Y=165.12X-33.991，r=0.999 9，线性范围：0.040 8～0.245 μg;山萘酚: Y = 168.47X-45.532, r= 0.999 6，线性范围：0.040 4～0.242 μg。
2.5 精密度实验取含槲皮素和山萘酚的混合对照品溶液，进样5 μl，按上述色谱条件，连续进样5次，记录槲皮素、山萘酚的峰面积，计算RSD分别为0.89%与0.92% (n=5)，表明精密度良好。
2.6 稳定性实验取柘木供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，10 h 测定，结果槲皮素峰面积的RSD为1.47%，山柰酚峰面积的RSD为1.15%。表明溶液中槲皮素和山萘酚在10 h内稳定性良好。