按照选定的色谱条件对10个批次的祖师麻注射液成品进行指纹图谱检测，记录色谱图并积分，图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版，截取0～45 min的色谱图，按平均值法生成对照图谱，进行相似度计算，确定得到8个共有峰，见图1。各共有峰的保留时间和峰面积见表2，相似度见表3。8个共有峰的峰面积之和占总峰面积的90%以上，保留时间的RSD为0.32％，相似度>96%，符合指纹图谱研究技术的要求。按表1梯度色谱条件对祖师麻甲素对照品溶液进行测定，由保留时间得到3号峰为祖师麻注射液中有效成分祖师麻甲素特征峰。
3 讨论
3.1 流动相的选择本
实验先采用了等度洗脱，发现用强洗脱能力的流动相时，出峰时间很早，且峰不能很好的分开，再用弱洗脱能力的流动相时，出峰少，且出峰时间太迟，故采用梯度洗脱。分别使用了乙腈-水，乙腈-0.5％磷酸，乙腈-0.5％醋酸，甲醇-水，甲醇-0.5％磷酸，甲醇-0.5％醋酸作用流动相进行线性梯度洗脱，用洗脱能力较强的乙腈时峰的分离情况较甲醇好，色谱峰窄，柱压低。在水相中加入磷酸或醋酸后，出峰明显增多，峰有较大的改善，而用醋酸时的基线较磷酸时平直，综合考虑，选用乙腈-0.5％醋酸作为本实验的流动相梯度洗脱。表2 10批祖师麻注射液HPLC指纹图谱共有峰保留时间和峰面积测定结果（略）表3 10批祖师麻注射液HPLC指纹图谱相似度测定结果（略）
3.2 检测波长的选择比较了254，285，305，315，326，330 nm时的色谱图，波长为326 nm时的色谱图最为理想，其它波长下在50 min后基线均有不同程度的飘移。
3.3 柱温的选择比较柱温为25，28，30，35℃时的色谱图，柱温在30℃以下时，个别成分峰吸收降低，分离度下降，在35℃以上时出峰时间提前，故本实验选择柱温为30℃。
分析确定的色谱条件下生成的液相色谱图可见，此条件下色谱峰数目最多，分离度较理想，注射液主要成分即祖师麻甲素主峰突出；方法学考察显示本实验方法稳定、可靠，对评价祖师麻注射液的内在质量有一定的实用价值。
利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统，以10批祖师麻注射液的指纹图谱综合平均作为对照模板，计算10批样品共有峰的相似度，均大于96%，说明不同时间生产的祖师麻注射液质量稳定。但从指纹图谱中还可以看出，虽然都出现了相应的成分峰，但是峰面积比值不尽相同，说明不同批号的注射液在含量上存在明显差异，原因可能为所使用的原料来源和提取工艺不够稳定，所以必须在固定原药材产地及提取工艺的前提下，才可能保证中药注射液的质量稳定可控。由此可见，通过指纹图谱可以控制生产流程，可以及时、全面地对生产过程中的药材、中间产物及其成品进行质量监控，从而为提高成品的内在质量提供保证。
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