2.3 统计分析采用SAS(STATISTICAL ANALYSIS SYSTEM)8.0统计软件进行数据处理,以GLM过程做总模型方差分析,从而选择较优提取条件。
2.4 提取条件的优选 称取催吐萝芙木粗粉20 g,根据影响溶剂提取的主要因素,选择溶剂用量(A)、提取时间(B)、提取溶液的pH条件(D)作为考察因素,每个因素根据实际情况取3个水平,按L9(34)表进行正交实验,分别按“2.1项”下所述方法制得浸膏。以提取物中的生物碱盐酸盐为指标,采用SAS 8.0统计软件进行统计分析。正交实验表头设计见表1,实验结果及处理数据见表2~3。表1 正交实验因素水平(略)表2 正交实验结果(略)表3 水溶性生物碱盐酸盐量测定结果方差分析(略)
正交实验结果经方差分析,各提取因素对提取效果均有显著影响,其中pH条件影响较显著,提取时间和溶剂用量次之。分别对各因素不同水平做差异显著性分析,可知A2与A3,C2与C3皆无显著性差异,其余两两之间差异显著。
根据正交实验结果,结合大生产可能性,并从降低成本角度考虑,最终确定提取工艺为A2B1D1,即药材粉碎成细粉,加10倍量95%的工业酒精在pH为2的条件下,浸提5 h。经过滤,浓缩,回收乙醇,制得浸膏。
2.5 最佳工艺条件的验证以正交实验的最佳工艺参数进行验证试验,结果如表4。可知,应用优化后的工艺进行提取试验,每100 g生药提取后能制得12.8 g水溶性生物碱盐酸盐。3次所得提取物中生物碱盐酸盐的量基本平行,说明此工艺条件重复性好。传统的醇提工艺大多直接以工业酒精浸渍3~7 d,优化后的提取工艺只需5 h,生物碱盐酸盐的提取率可达12.8%。表4 最佳工艺结果分析(略)
3 结论
正交实验结果表明,提取溶剂的pH条件对提取水溶性生物碱影响最大,提取时间次之,溶剂用量影响最小。在A3B1D1条件下,溶剂用量稍大,成本过高,故选择A2B1D1为最佳提取工艺条件。
本实验旨在优化水溶性生物碱的提取工艺,首次采用雷氏铵盐沉淀法从催吐萝芙木浸膏中获得生物碱盐酸盐。由于萝芙木生物碱的药用形式多为水溶性盐,因此以沉淀法得到的盐酸盐作为考察指标,具有一定的现实意义。传统的醇提工艺大多直接以工业酒精浸渍3~7 d,而在本工艺条件下,通过调节工业酒精的pH值,加入酸作为浸提辅助剂,提高了浸提效能,大大地缩短了浸提时间。该工艺稳定可行,为提取水溶性生物碱奠定了基础。
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