含FBS的培养液终止胰酶消化，然后用移液枪将细胞转移至离心管，设定离心机转速1000r/min左右，离心3分钟左右，去除上层培养液，留下底部白色细胞团；
2. 细胞团中加入冻存液（90%完全培养液+10%DMSO，较敏感细胞可用
90?S +10%DMSO。加DMSO是为防止细胞被冰晶刺破，用FBS取代完全培养液是为减少水分），用移液枪轻轻吹打制成细胞悬液；
3. 分转到冻存管内，1.8ml的冻存管每个可加入1.2至1.5ml，将冻存管口封严，
贴上标签，注明冻存时间、细胞种类及代数；
4. 按下列顺序降温，并最终冻存：室温、4℃冰箱放置30min 、 -20℃冰箱放
置2h、-70℃冰箱过夜（我们无此温度冰箱，放在液氮表面8h至16h代替）、投入液氮。
注意：准备冻存的细胞，最好是对数期生长的细胞，一般取细胞铺满底部70%
左右时可消化冻存，等细胞铺满底部时，细胞通常不是最佳状态。悬浮细胞可在常规换液前几小时操作。
第5章 主要设备操作说明
5.1 安全柜使用说明
1. 向上推动打开玻璃窗（不要超过面表上标记的刻度）；
2. 大概2分钟后风速稳定（控制面板上风速不变化），再进行操作，如果在打
开玻璃窗之前紫外灯是打开的，则最好多等几分钟，以使紫外光产生的臭氧被排出；
3. 实验操作完成后，用酒精擦拭台面； 4. 关闭玻璃窗，设定紫外灯开启时间。
注意：实验操作过程中，如果袖子或其它物体遮住过滤网，安全柜会警告风速不稳定，尽量避免出现这种情况。
进一步详细操作可参考安全柜说明书。
5.2 培养箱使用说明
1. 打开培养箱之前现在手上和门把手处喷上酒精；操作时不要和周围的人交谈
以防口中细菌进入培养箱；
2. 断电后，待温度上升到37度，再设定二氧化碳的浓度为5%，否则二氧化碳
传感器不准确。
进一步详细操作见培养箱说明书。
5.3 显微镜使用说明
每次使用的开始和结束时间需精确登记，尤其是关闭汞灯的时刻，具体的使用操作见显微镜使用说明。
操作步骤如下： 一、
明场观察
1．接通电源线，打开电源开关（“︱”为开，“○”为关），同时按下显微镜前面的按纽（有灯泡）；
2．用光路选择杆选择“观察”光路（有眼睛图形），选择所需放大倍数的物镜，并将选择环置于相应的位置，使用光调节旋钮和滤光片，调节至适当亮度； 3．将标本放在载物台上，转动粗微调调节视野内图象清晰； 4．调节目镜使观察舒适；
5．如需拍照，则打开电脑，选择所需软件，将光路杆调至“旁路光口”（有相机图形），即可拍摄并保存；
6．使用完毕后，关闭主开关（至O），取下电源插头。 二、
DIC观察
1. 打开明场电源开关（“︱”为开，“○”为关）； 2. 将样品置于载物台上，用样品夹夹好；
3. 将起偏器、检偏器、DIC棱镜推入光路，荧光滤块转盘拨到“1”位置，DIC棱镜应与相应的物镜倍数相匹配； 4. 先选用低倍物镜（“10×”）；
5. 调节透射光的强度，调节焦距，找到视野；
6. 换到高倍镜头，观察样品，DIC观察时，光路选择拉杆拉到中间位置，既可观察，也可拍照。 三、
荧光观察
1. 如使用荧光，打开荧光光源，此时最好关闭明场光源。将荧光光路shutter打开（“○”为开，“●”为关），需保护样品时关闭shutter； 2. 选择所需波段的荧光，并用荧光调节杆调节亮度；
3. 从低倍镜开始观察，调焦，找到预观察视野，依次换到高倍镜头，观察
样品；
4. 不观察时，要及时使用光栅切断荧光（●－关，○－开），避免样品荧光衰减，如荧光较暗，将周围光亮度减至最低（关灯，拉上窗帘）； 5. 拍摄步骤同普通明场观察。 四、
软件功能简介
1. 图像叠加、自动定时拍摄（ISO=200时比较清晰）； 2. 比例尺设定（可设定标尺的参数）；
3. 可调节背景光颜色以达到白平衡，从而得到真实标本颜色； 4. 调节曝光时间可改变得到图像的亮暗程度。
注意事项
1. 光纤不能大角度弯曲以免折损；
2. 在使用完毕关机时,将镜体电压调至最低, 即保证光的强度最弱才可关闭电源，防止重新开机时电压高而烧坏灯炮；
3. 不要频繁开关电源;为了延长汞灯使用寿命,请在打开电源后15分钟之内不要关电源,第二次重新开机间隔时间最少10分钟;同时建议汞灯每次使用不超过2小时；
4. 电脑主机机箱后面插着的类似U盘的器件，不要拔掉（那不是U盘！）； 5. 对于光源的控制也要注意，转动光强调节钮时切忌小心，不可太过，以防损坏；
6. 使用完毕后一定要将物镜置于载物台下方，保持清洁。这一步可以通过转动三孔转换器实现；不要随意拆散物镜；
7. 对目镜、物镜、聚光镜等光学部件的表面有灰尘时,应先用吹气球吹,再用棉签蘸清洁液擦拭,方法是由内向外螺旋型擦拭，清洁液建议使用70%乙醚和30%无水酒精混合液；同时注意不要随意擦拭荧光激发块；
8. 将镜头转到低倍镜，取出样品，若使用过油镜用干净的擦镜纸擦拭镜头； 9. 载玻片不同厚度时，需要转动物镜上的校正环才能得到最清晰图像。
5.4 灭菌锅使用说明
1. 打开电源按钮（前面板右上方）；
2. 一手按住顶盖靠身体处（有手型标志），然后另一手将前面板左上方的开关
拨到右上方，此时顶盖打开；
3. 检查灭菌锅水位是否处于底部中央大孔和周围8个小孔之间。如果低于大孔，
则需要加水，可将灭菌锅自带冷凝壶中的水倒入（注：冷凝壶中的水位要保持在LOW与HIGH之间），也可加入纯净水和去离子水，不要用自来水，以免产生水垢；如果处于大孔和小孔之间，则可将需灭菌器材用纱布包好放入到金属框中（一定要放入金属框中），置于灭菌锅中灭菌。对瓶装水灭菌时，注意将瓶盖拧松，让水蒸气排放通畅，以免爆炸；
4. 盖好顶盖，打开顶盖左下方控制面板的控制程序开关，灭菌时参数为：灭菌
温度120度，灭菌时间20到40分钟，灭菌结束后保温温度为60度（保温温度没有明确要求）。灭菌中途，可按控制面板的stop键强制停止，强制停止后打开盖子前，请注意显示器中显示灭菌锅中的温度和压强，以防烫伤； 5. 灭菌结束及时取出被灭菌器材，然后放入干燥箱中，关闭电源按钮（灭菌锅
进一步操作说明，去查阅产家说明书）。
5.5 干燥箱使用说明
1. 打开左侧面左下角的电源按钮；
2. 按箱体前侧左下方控制面板的Call 按钮，然后上下键设定参数（主要设定
干燥温度80，干燥时间已设定48小时后自动关闭，有些不需要干燥48小时，如急用的话，干燥后直接取出就行。参数一般按默认即可）； 3. 按Start按钮，开始升温干燥。
5.6 电子天平使用说明
开机后注意预热20分钟，否则可能称量结果不准确。