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产壳聚糖酶菌株的筛选及初步鉴定
作者：王建兴 赵琼洲 冯会家 来源：《科技视界》2014年第29期
【摘 要】从7份土壤样品和1份水样中，筛选得到7株产壳聚糖酶的菌株。观察菌落呈白色、圆形、隆起，表面光滑、湿润、边缘平整，周围有透明圈。对其中的5株菌株进行了镜检和部分生理生化特征的鉴定，结果均为G-、杆状、不产芽孢、氧化型、发酵产酸。 【关键词】微生物学；壳聚糖酶；筛选；鉴定
甲壳素，又称几丁质、甲壳质、聚乙酰氨基葡萄糖等，通过β-D-（1， 4）-糖苷键连接而成的线性聚合物，广泛存在于甲壳纲动物、软体动物、昆虫、真菌以及高等植物中，自然界每年生成的甲壳素将近100亿吨，是地球上含量仅次于纤维素的天然高分子化合物、数量最大的含氮有机化合物。
甲壳素脱乙酰化后的产物是壳聚糖。一般而言，N-乙酰基脱去55%以上，或者说能在1%乙酸或1%盐酸中溶解1%的脱乙酰甲壳素，称之为壳聚糖。作为工业品的壳聚糖，N-脱乙酰度在70%以上。壳聚糖一方面来自甲壳素，另一方面在自然界中也大量存在，是迄今为止发现的唯一的天然碱性多糖。壳聚糖呈白色或灰白色，平均分子量在1.2×105左右，不溶于水、碱性溶液或普通有机溶剂，但可溶于盐酸、硝酸、甲酸、乙酸等稀酸。
不同分子量的壳聚糖的性质各异，分子量低于10kDa的水溶性壳聚糖，具有降血糖、降血脂、抗真菌、抗细菌以及抑制肿瘤生长等功效，在医药、食品等领域具有潜在的发展前景。目前制备低分子量壳聚糖的方法，主要有化学法和酶解法。其中，酶解法以条件温和、产率高、污染小等优点，成为研究的热点。壳聚糖酶（Chitosanase）是一种专一性降解壳聚糖的水解酶，能特异性作用于壳聚糖的β-D-（1，4）-糖苷键，得到聚合度低至2～7的水溶性壳寡糖。 甲壳素广泛分布于湖泊中，也是湖水中化学耗氧量的重要来源。筛选、驯化产壳聚糖酶菌株，经过培养后，附着在生物骨料中投入水体中，可以提高水体净化能力。
近年来，国内外研究人员从自然界中分离到Beauveria bassiana，Pseudomonas sp.，Mitsuaria chitosanitabida，Bacillus sp.等产壳聚糖酶菌株，并对其分类学、发酵工艺以及酶学性质，展开了一系列研究。本文筛选得到7株产壳聚糖酶菌株，并对其中的5株菌，进行了初步鉴定。
1 材料与方法
1.1 主要材料、试剂及培养基
壳聚糖：粉状、脱乙酰度≥90%（中脱乙酰度），粘度55.8mpa·s，武汉某公司提供。