1、肺动脉平滑肌细胞生长至70%-80%融合时，用胰酶消化，收集贴壁细胞，细胞计数，制
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成5×10/ml密度的细胞悬液，在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（在37℃，5% CO2的条件下）。
2、更换新鲜1％FBS+DMEM低血清培养液，随机分为上述4组，每组做6个复孔，并设置空白对照孔。
3、将培养板分别在常氧和低氧培养箱中培养24h。
4、向每孔加入10μL CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。 5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。（2h后） 6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
7、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。 注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。 备注：
①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。（怎么判断哪个时间好？）
②有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔减的差异。加入CCK试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基页面下加，容易产生气泡，会干扰OD值读数。 ③白细胞可能需要培养较长时间。
④当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。
⑤如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。
⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。 活力计算：
细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）] ×100 A（加药）：具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度 A（空白）：具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度 A（0加药）：具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度 *细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力
CCK-8：Cell Counting Kit-8 Sigman NO.96992 (10ul)