试卷一是老师给的，答案仅供参考，其他试卷网上搜得！
基因工程练习题
一、
选择题(单选或多选)
2． 第一个作为重组DNA载体的质粒是( C ) (a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl8
3． 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( B )不太恰当。 (a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成
(b)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 (d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统 4．Ⅱ型限制性内切核酸酶： ( B )
(a)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列 (b)仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供
(c)限制性识别非甲基化的核苷酸序列 (d)有外切核酸酶和甲基化酶活性 (e)仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 5．下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?( D E ) (a)限制酶是外切酶而不是内切酶
(b)限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割 (c)同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的
(d)一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端 (e)一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA，产生平末端 6．第一个被分离的Ⅱ类酶是： ( C ) (a)EcoK (b)HindⅢ (c)HindⅡ (d)EcoB
7．在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?( B ) (a)反应时间 (b)酶量 (c)反应体积 (d)酶反应的温度 10．限制性内切核酸酶可以特异性地识别： ( B )
(a)双链DNA的特定碱基对 (b)双链DNA的特定碱基序列 (c)特定的三联密码 (d)以上都正确
11．下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是( A )。 (a)Sau3A I (b)E．coRI (c)hind III (d)Sau 3A1 12．限制性内切核酸酶的星号活性是指：( A )
(a)在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。 (b)活性大大提高 (c)切割速度大大加快 (d)识别序列与原来的完全不同 13．下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?( D ) (a)甘油含量过高 (b)反应体系中含有有机溶剂
(c)含有非Mg2+的二价阳离子 (d)酶切反应时酶浓度过低
14．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( B )不太恰当
(a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成
(b)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 (d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统
15．在长模板链的指导下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用( D ) (a)T4DNA聚合酶 (b)Klenow酶．
(c)大肠杆菌DNA聚合酶I (d)T7DNA聚合酶 17．在基因工程中，可用碱性磷酸酶( A B )
(a)防止DNA的自身环化 (b)同多核苷酸激酶一起进行DNA的5，末端标记 (c)制备突出的3，末端 (d)上述说法都正确 19． 下列哪一种酶作用时需要引物? ( C )
(a)限制酶 (b)末端转移酶 (c)反转录酶 (d)DNA连接酶 20．S1核酸酶的功能是( B C )
(a)切割双链的DNA (b)切割单链的RNA (c)切割发夹环 (d)以上有两项是正确的 21．Klenow酶与DNA聚合酶相比，前者丧失了( C )的活性。
(a)5，--3，合成酶， (b)3，--5，外切酶 (c)5，---3，外切酶 (d)转移酶 24． 下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?( C )
(a)质粒 (b)黏粒 (c)酵母人工染色体(YAC) (d) ?噬菌体 (e) cDNA表达载体 27．同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：( B ) (a)OCDNA>SCDNA>LDNA (b)SCDNA>LDNA>OCDNA (c)LDNA>OCDNA>SCDNA (d)SCDNA>OCDNA>LDNA
28．pBR322是一种改造型的质粒，含有两个抗性基因，其中四环素抗性基因来自： ( C ) (a)ColEl (b)Ri质粒 (c)pSCl01 (d)pUCl8
29．关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确?( B ) (a)在不同的宿主中具有不同的复制机制 (b)在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点 (c)在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶 (d)在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率 32. Ti质粒：( C D E )
(a)可从农杆菌转到植物细胞中 (b)作为双链DNA被转移
(c)在植物中导致肿瘤 (d)介导冠瘿碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素 (e)需要细菌的vir基因帮助转移 (f)在植物细胞中作为染色体外质粒 33．黏粒(cosmid)是一种人工建造的载体，( A B C )
(a)它具有COS位点，因而可进行体外包装 (b)它具有质粒DNA的复制特性 (c)进入受体细胞后，可引起裂解反应 (d)进入受体细胞后，可引起溶源化反应
34．有两种确定核酸中核苷酸序列的方法：化学序列分析法(Maxam-Glbert)和酶学序列分析法(Sanger)。酶学测序法
的基本原理／优点是：( B )
(a)碱基与特殊染料间不同的相互作用
(b)一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止 (c)限制性位点与DNA末端标记的相关性 (d)可同时对DNA双螺旋的两条链进行测序
(e)反应是DNA特异的，RNA不会带来干扰。这样既减少纯化步骤，也节约了开支。 35．关于cDNA的最正确的说法是：( C )
(a)同mRNA互补的单链DNA (b)同mRNA互补的双链DNA (c)以mRNA为模板合成的双链DNA (d)以上都正确
36．用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为：( ) (a)染色体DNA断成了碎片 (b)染色体DNA分子量大，而不能释放 (c)染色体变性后来不及复性 (d)染色体未同蛋白质分开而沉淀 37. 关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确?( ) (a)溶液I的作用是悬浮菌体 (b)溶液Ⅱ的作用是使DNA变性 (c)溶液Ⅲ的作用是使DNA复性
(d)质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性
38. Clark做了一个有趣的实验，发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板，在双链DNA的 末端加一个碱基，主要是加( ) ． (a)dGTP (b)dATP (c)dCTP (d)dTTP
39．根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、cDNA文库等。在下列文库中， ( )属cDNA文库
(a) YAC文库 (b) MAC文库 (c) 扣减文库 (d) BAC文库 40．下面关于多克隆位点(multiple clone site,MCS)的描述，不正确的—句是( ) (a)仅位于质粒载体中 (b)具有多种酶的识别序列
(c)不同酶的识别序列可以有重叠 (d)一般是人工合成后添加到载体中 41．在cDNA技术中，所形成的发夹环可用( )
(a)限制性内切核酸酶切除 (b)用3’外切核酸酶切除 (c)用S1核酸酶切除 (d)用5’外切核酸酶切除 42．在DNA的酶切反应系统中，通常：( )
(a)用SS
C缓冲液 (b)加入Mg2+作辅助因子
(c)加入BSA等保护剂 (d)上述说法中，有两项是正确的 43． 黏性末端连接法，不仅操作方便，而且( )
(a)产生新切点 (b)易于回收外源片段 (c)载体不易环化 (d)影响外源基因的表达 45．关于DNA接头在基因工程中的作用，下列说法中哪一项不正确?( ) (a)给外源DNA添加适当的切点 (b)人工构建载体 (c)调整外源基因的可读框 (d)增加调控元件 46．cDNA文库包括该种生物的( )
(a)某些蛋白质的结构基因 (b)所有蛋白质的结构基因 (c)所有结构基因 (d)内含子和调控区
47．下列关于建立cDNA文库的叙述中，哪一项是错误的?( ) (a)从特定组织或细胞中提取DNA或RNA (b)用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA (c)以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA (d)新合成的双链DNA甲基化
48．下列对黏性末端连接法的评价中，哪一项是不正确的? ( ) (a)操作方便 (b)易于回收片段
(c)易于定向重组 (d)载体易于自身环化，降低重组率 49．关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确?( ) (a) 具有可诱导性 (b)具有可转移性
(c)细菌生长的任何时期都可以出现 (d)不同细菌出现感受态的比例是不同的 51．Southem印迹的DNA探针( )杂交。
(a)只与完全相同的片段 (b)可与任何含有相同序列的DNA片段 (c)可与任何含有互补序列的DNA片段’．
(d)可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段 (e)以上都是 52． 用下列方法进行重组体的筛选，只有( )一定说明外源基因进行了表达。 (a)Southem印迹杂交 (b)Northem印迹杂交 (c)Western印迹 (d)原位菌落杂交 53．下列哪一个不是Southern印迹法的步骤?( ) (a)用限制酶消化DNA (a)DNA与载体的连接
(c)用凝胶电泳分离DNA片段 (d)DNA片段转移至硝酸纤维素膜上 (e)用一个标记的探针与膜杂交 54． 报告基因( )
(a)以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列 (b)以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区
(c)能用于检测启动子的活性 (d)能用于确定启动子何时何处有活性 56. 切口移位是指在( )作用下，使( )带上放射性标记。 (a)DNA聚合酶I，RNA (b)DNA聚合酶I，DNA (c)DNA聚合酶Ⅲ，RNA (d)DNA聚合酶Ⅲ，DNA 57．用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的( ) (a)DNA (b)RNA (c)抗体 (d)抗原 59．用免疫化学法筛选重组体的原理是( )
(a)根据外源基因的表达 (b)根据载体基因的表达 (c)根据mRNA同DNA的杂交 (d)根据DNA同DNA的杂交 60．在切口移位标记DNA探针时只能使用( )
(a)Klenow酶 (b)DNA聚合酶I (c)DNA聚合酶Ⅱ (d)DNA聚合酶Ⅲ 二、
问答题：
说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。
什么是限制性内切核酸酶的星号活性? 受哪些因素影向?
在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么? 下面几种序列中你认为哪一个(哪些)最有可能是Ⅱ类酶的识别序列： GAATCG，AAATTT， GATATC， ACGGCA? 为什么?
5. 当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施?为什么? 6. 什么叫穿梭载体？
7. 怎样将一个平末端DNA片段插入到EcoR I限制位点中去? 8. 切口移位(nick translation)标记探针的主要步骤有哪些? 9. 什么是Western印迹?它与Southern印迹有什么不同?
10．在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用cDNA而不用基因组DNA?为什么要在cDNA前加上细菌的启动子?
11. 你在做Southern印迹分析，将DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜后用标记探针杂交，最后发现放射自显影片是空白。试分析原因。
12．Mn2+、Mg2+对Dnase I(deoxyribonuclease ?)的活性有什么影响?Dnase I在基因工程中有什么作用?
13．某一质粒载体具有Tetr和Kanr的表型，在Kan抗性基因内有一Bgl I的切点。现用Bgl I切割该载体进行基因克隆，问：(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素?(2)培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型?(3)如何利用抗性变化筛选到含有插入片段的重组体?
14．什么是原位菌落杂交(colony hybridization)? 15．Northern印迹与Southern印迹有什么不同?
16．为了大量获得许多用于生化鉴定的产物，你想将拟南芥中的一个序列已知、编码单体酶蛋白的基因在单细胞微生物中表达，你如何确保最终能得到产物? 17．说明Sanger DNA测序法的原理。 18．为什么反转录酶在聚合反应中会出错?
19. YAC载体具有什么样的功能性DNA序列?为什么在克隆大片段时，YAC具有优越性?
20．假定你分离到一个E．coli的Thy- 突变体，并推测有可能是ThyA基因突变。请设计一个方案用PCR从染色体DNA扩增突变的ThyA基因，测定突变的序列。(注：E．coli野生型的ThyA基因的序列是已知的)
21．用一限制性内切核酸酶切割Lac+ Tet+的质粒载体，已知该酶识别的是4个碱基序列，并产生有两个碱基突出的单链末端，该酶在lac基因内有切割位点，并在第二个氨基酸密码子内，该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后，用DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端，然后重新连接成环，转化Lac- Tets受体菌，筛选Tetr转化子，问：Lac的基因型是什么?并说明原因。 22．什么是随机引物(random primer)?如何标记DNA? 23．列举质粒载体必须具备的4个基本特性。
24．酵母人工染色体要在酵母细胞中稳定存在，必须有哪些基本的结构?
25．欲将一真核生物的结构基因克隆后转移到原核生物(如E．coli)中进行表达，克隆时应注意哪些问题?
26．用EcoRI和Hind Ⅲ分别切割同一来源的染色体DNA，并进行克隆，在前者的克隆中筛选到A基因，但在后者的克隆中未筛选到A基因，请说明原因。
27．什么是Klenow酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用?
31． 什么是同聚物加尾连接法(homopolymer tails joining)?用何种方法加尾?具有哪些优缺点?