氮蓝四唑(NBT)法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性
实验三 氮蓝四唑（NBT）法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性
一、实验目的
1、了解氮蓝四唑（NBT）法测定植物体内超氧化物歧化酶（SOD）活性的基本原理。
2、掌握氮蓝四唑（NBT）法测定植物体内超氧化物歧化酶（SOD）活性的基本操作方法。 二、实验原理
超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶。本实验依据超氧化物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生超氧阴离子自由基，超氧阴离子自由基可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm处有最大吸收。而SOD可清除超氧阴离子自由基，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。 三、材料、仪器设备及试剂 （一）材料
水稻或小麦等植物叶片。 （二）仪器设备
高速台式离心机，分光光度计，微量进样器，荧光灯（反应试管处照度为4000Lx），试 管或指形管数支。 （三）试剂
（1）0.05mol/L磷酸缓冲液（pH7.8）。91.5ml0.05MNa2HPO4+8.5ml0.05M NaH2PO4 。
（2）130mmol/L甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml。
（3）750µmol/L氮蓝四唑溶液：称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存。