氮蓝四唑(NBT)法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性
（4）100µmol/LEDTA-Na2溶液：称取0.03721g EDTA-Na2，用磷酸缓冲液定容至1000ml。
（5）20 µmol/L核黄素溶液：称取0.0753g核黄素用蒸馏水定容至1000ml，避光保存。 四、实验步骤
1、酶液提取
取一定部位的植物叶片（视需要定，去叶脉）0.52g于预冷的研钵中，加1ml预冷
的磷酸缓
液在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使终体积为4ml。取4ml于4℃10000r/min离心
20min
上清液即为SOD粗提液。
2、显色反应
取10mL试管（要求透明度好）4支，2支为测定管，另2支为对照管，按下表加入
各种溶液：
各溶液显色反应用量混匀后将1支对照管置暗处，其他各管于4000lx日光下反应
20min（要
各管受光情况一致，温度高，时间缩短，低时延长）。
3、SOD活性测定与计算
至反应结束后，全部移入暗处，以不照光的对照管作空白，分别测定其他各管的
吸光度。
注意：用放在暗处的缓冲液代替酶液的空白管调零，各试剂按比例混合好（3.5ml缓冲液+0.5ml甲硫氨酸+0.5ml氮蓝四唑+0.5ml EDTANa2+0.40ml蒸馏水），再加100ul酶液，核黄素0.5ml最后单独加入。总体积6.0mL
表10 SOD活性测定的试剂量