给志同道合的朋友
4.课题拟采取的研究方法(或技术路线、实施方案)及其可行性和风险分析 研究方法: (1) “癌泰得”的中试研究 生产工艺的研究：采用固相“流过式”自动法合成，离子交换-反相法纯化 产品。 中试产品质量研究和活性测定方法建立：采用毛细管电泳检测产品纯度，结 构采用质谱法，定量采用 HPLC 法，活性采用体外端粒酶活性测定法。 中试产品生产和检定规程草案。 三批中试产品的初步稳定性试验和制剂处方的研究。
三批中试品的送检。 端粒酶反义寡核苷酸序列的确证：采用生物质谱法。 (2) “癌泰得”的临床前药理学和毒理学研究 主要药效学研究：在体外进行抗瘤谱的筛选。再进行敏感瘤株的体外和体内 (裸鼠)抗瘤试验。
至少重复三次。严格设臵阳性对照药。 一般药理学试验：在安全剂量范围内观察端粒酶反义寡核苷酸对精神、心血 管系统和呼吸系统的影响。 药代动力学研究：观察反义序列的组织器官分布、测定药代动力学参数(Vc、 t1/2 和 CLs 等)和代谢转化。采用固相提取法、毛细管凝胶电泳、荧光标记和 质谱分析相结合方法检测。 毒理学试验。观察单次给药和重复给药后在动物的潜在毒性和毒性靶器官。
(3) 撰写申报“癌泰得”临床试验的资料，申报临床试验。 可行性分析和风险分析: (1) 技术及条件的可行性：课题组成员已掌握反义寡核苷酸的合成、化学修饰、纯化 及端粒酶活性检测等方面技术。在临床前评价方面，课题组成员从事生物技术药物临 床前评价已有多年，建立了较为完整的生物技术药物临床前评价的实验技术和方法， 同时有较多的有关反义核酸药物临床前评价的国外文献资料可供借鉴。因此从技术上 完成本课题的工作是可行的。 (2) 工作基础：前期工作包括合成方法研究、三批小试合成和纯化、质量检验、LD50、 药效学试验和采用荧光标记结合 CE 测定反义寡核苷酸的浓度等。结果表明，我们所 设计和合成的“癌泰得”毒性小(LD50 大于 1g/kg) ,对肝癌(HepG2)、肺癌(GLC)、脑 胶质瘤(BT325)、胃癌(BGC823)及乳腺癌(MCF-7)细胞均有不同程度的抑制作用，具有 明显的抗裸鼠移植性肿瘤生长作用。因此，预计通过对端粒酶反义寡核苷酸进行系统 的临床前研究最终能进入临床试验。 (3) 风险分析：本课题的难点在于中试生产和临床前药代动力学方法学的研究。反义
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