给志同道合的朋友
6.课题现有工作基础与申请单位承诺提供的支撑条件，其他所需增添的支撑条件和主 要仪器设备(说明用途) 工作基础： (1) 药学初步研究 已进行了三批小规模“癌泰得”的合成、纯化及质量控制方法的研究。利用本 室的 DNA 合成仪合成了三批“癌泰得” ,平均缩合率达 98.5±0.5%。采用阴离 子加反相柱层析法纯化了三批合成硫代“癌泰得” ,平均回收率 85.0±2.0%。 , 用阴离子交换 HPLC 和毛细胞管凝胶电泳方法对硫代 hEST212 进行定性分析和 质量控制，可分辨 n-1 及非硫代“癌泰得” 。 针对人端粒酶具有逆转录酶活性蛋白质亚基(hEST2)的反义寡核苷酸的靶位 筛选和序列长度的优化。 根据序列和 RNA 二级结构特征， 利用相应软件设计和 合成了 20 条硫代反义寡核苷酸，观察在体外和体内的抗肿瘤活性。其中一条 序列“癌泰得”抑瘤率达 89.9%,申请了中国和国际专利。国内专利公开号为 CN1253179A,国际专利号为 PCT/CN99/00173。 (2) 临床前药理毒理学初步研究 “癌泰得”作用的序列特异性分析。通过合成正义、随机(碱基组成相同) 及错配的序列(GC 含量相同)及硫代修饰，在体外观察到“癌泰得”
(0.2、
0.4 和 0.8 mol/L)抑制肿瘤细胞生长(HepG2)最高达 65.0%,表明“癌泰得” 的序列作用特异性。 “癌泰得”抗瘤谱和作用时间的研究。在体外观察到“癌泰得”对胃癌细胞 (BGC-823)作用最强(EC50 为 0.25 mol/L) ,对肝癌、肺癌和乳腺癌的作用 强度中等。连续作用 4 天， “癌泰得”的体外抗瘤活性达峰值。 “癌泰得”对裸鼠肝移植瘤抗癌活性的研究。腹腔注射 10 天“癌泰得”12.5 mg/kg、25 mg/kg 和 50mg/kg,抑瘤率分别为 29.4%、 47.9%和 52.7%。静脉 注射 25mg/kg 抑瘤率为 49.3%。 其中连续腹腔注射 “癌泰得” (6.2 mg/kg、 12.5 mg/kg 和 25mg/kg)30 天，最大抑瘤率达 80%以上。 单次给药毒性试验。结果发现“癌泰得”在雌性小鼠的 LD50 为 1173.9 mg/kg, , 雄性小鼠的 LD50 为 1098.8mg/kg。
提供的支撑条件 人员: 具有多学科长期从事反义核酸、细胞生物学、药理学、药物分析及临床 前安全性评价等的专门人才参与本课题研究。 大多数是具有博士或硕士学位的 年轻人且在各自的研究领域有一定的工作经验。 已 有 的 仪 器 设 备 : AKTA Oligopilot(Amersham-Pharmacia,14 万 USD) 及 390Z(ABD 公司，11.7 万 USD)大规模 DNA 合成仪 2 台，用于组合寡核苷酸库、 体内外活性实验用反义寡核苷酸的合成。3900 高通量(48 柱，ABD 公司，13.013