(2)输出:除了以文本形式外,还可以通过JalView显示和编辑结果。此外,还可以另外使用GeneDoc(常见于文献)及DNAStar软件等显示结果。多序列比对的结果还用于进一步绘制进化树。
3、ORF(Open Reading Frame)分析
从核酸序列翻译得到蛋白质序列,需要进行ORF分析,每个生物信息学分析软件包几乎都带有翻译功能。推荐使用NCBI的ORF Finder
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/gorf.html)软件或EMBOSS中的getorf(http://bioinfo.pbi.nrc.ca:8090/EMBOSS/)软件。ORF Finder 以图形方式,分为正链+1、+2、+3和反链+1、+2、+3六个相位预测ORF;Getorf可指定预测ORF的长度下限和指定预测正反链。进行ORF分析虽然比较简单,但应注意以下几点:
(1)序列的准确性:尤其是通过计算机拼接的序列,需要根据EST和基因组序列进行反复校正。
(2)ORF是否完整:看在ORF上游同一相位是否具有终止码,或者具有起始密码子。
(3)参考Kozak一致性规律,即起始密码子位点符合A/GCCATGG。
(4)不要忽略反义读框。
4、染色体定位
根据基因组图谱对序列进行染色体定位和浏览其基因组上下游基因。具体方法为:(1)进行Genomic BLAST搜索。(2)通过“Genome view”观察基因组结构。(3)点击相应染色体区域,通过表意图(ideogram)和相应区域上下游的基因进行精确定位。
5、基因结构分析
根据基因的mRNA序列及基因组序列,可以进行基因结构的分析。推荐使用BLAST或BLAT(http://genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgBlat?command=start)进行分析。由于真核生物转录后内含子将被剪切,因此将mRNA和基因组进行比对以后,会发现mRNA的每个外显子与基因组序列片断匹配,根据这些片段可以判断外显子的数目和大小。外显子和内含子具体边界的确定,可以参考GT/AG一致性规则。BLAT的结果直接显示外显子数目、大小及边界。