农杆菌感受态的制备与转化
实验室根癌农杆菌感受态的制备：
1. 取保存于-70°LBA4404菌株在YEB（含125µg/ml链霉素或50mg/l利福平）或平板活化，挑取单菌落接种于5mlYEB（含125µg/ml链霉素或50mg/l利福平）或YEP(含50mg/l利福平)液体培养基中，28°C、200rpm培养24-28h。
2. 取2ml菌液接种至50mlYEB（含125µg/ml链霉素或50mg/l利福平）或利福平)中，28°C、200rpm培养至OD600≈0.5左右。
3. 菌液冰浴30min后，4°C、8000rpm离心10min收集菌液。
4. 弃上清，用10ml 0.15mol/l Nacl重悬菌体，4°C、8000rpm离心10min收集菌液。 5. 弃上清，用2ml 20m mol/l Cacl2重悬菌体，加入1ml60%无菌甘油(使其终浓度为20%），
每管100μl分装，液氮冻存，-70°C保存。
重组质粒电转入农杆菌中：
1. 从大肠杆菌中提取重组质粒，将5μl重组质粒加入农杆菌感受态中，至于冰上30min。 2. 将混合物加入电击杯中，选择“Agr”模式（电压2.2kv，时间4.9ms）电击，加入800
μl YEB培养基，28°C、200rpm振荡培养3-5h，8000rpm离心30S（实际操作中不离心，吸取菌液50、100、150ul等多做几个梯度，用无菌水稀释至180ul），弃上清，涂布于YEB平板（含农杆菌和质粒所带抗生素，如Kan和利福平）。 3. 28°C恒温箱中倒置培养48h（24h以上）。
4. 从农杆菌中提取质粒，双酶切，琼脂糖凝胶电泳检测；扩目的片段并测序验证。 5. 转化烟草等实验材料。
YEB培养基：
1. 0.5%（w/v）蔗糖，0.1%（w/v）细菌用酵母提取物，1%（w/v）细菌用胰蛋白胨，0.05%（w/v）MgSO4·7H2O，调节pH7.0，121°C灭菌15min。 2. 固体加入1.5%的琼脂粉（100ml加1.5g）。
3. 加所需抗生素，如Kan+ ，利福平，链霉素。