农杆菌的培养与感受态制备(2)

2021-01-20 18:21

农杆菌感受态制备:

1)活化原始农杆菌AGL-1菌株于YEB(含50µg/ml羧苄青霉素)平板上,28°C下倒置培养约2d; 2)从上述平板上挑单菌落于约5mlYEB液体培养基内(含50µg/ml羧苄青霉素),于200rpm、28°C振荡培养过夜;

3)吸取1~2ml培养菌液接种到100mlYEB(含50µg/ml羧苄青霉素)中,于200rpm、28°C摇床培养至OD660≈0.5;

4)5000rpm,4°C下离心5min,去上清液,用20ml冰预冷的10%(v/v)甘油重悬菌体,此步骤重复两次;

5)5000rpm,4°C下离心5min,去上清液,用1ml冰预冷的10%(v/v)甘油重悬,每管40µl分装于1.5ml灭菌离心管中,液氮速冻后保存于 80°C备用。

农杆菌电击转化:

用电击法将载体质粒导入根癌农杆菌AGL-1的具体操作为:将5~50ng质粒DNA加入冰浴解冻的农杆菌感受态细胞中混匀,然后转入冰预冷的电击杯中,将其置于电转化仪(Bio-Rad)中脉冲8~12ms。将电击后的农杆菌转入1mlYEB中,于28°C,200rpm摇床培养2~4hr后,5000rpm离心5min收集菌体,弃大部分上清液,用余下液体重悬菌体,混匀后涂布在含相应抗生素(如卡那霉素和羧苄青霉素)的YEB平板上,28°C恒温箱中倒置培养2d左右至抗性菌落出现。


农杆菌的培养与感受态制备(2).doc 将本文的Word文档下载到电脑 下载失败或者文档不完整,请联系客服人员解决!

下一篇:第三章_专题一中国能否跨越“卡夫丁”峡谷

相关阅读
本类排行
× 注册会员免费下载(下载后可以自由复制和排版)

马上注册会员

注:下载文档有可能“只有目录或者内容不全”等情况,请下载之前注意辨别,如果您已付费且无法下载或内容有问题,请联系我们协助你处理。
微信: QQ: