植物组织培养实验中相关的问题答案(2)

2021-01-20 18:37

解答了组培中玻璃化 培养基过软等相关的问题

[Ca(ClO2)],使用时用饱和溶液,杀菌的原理在于它分解出具有杀菌作用的氯气。氯与蛋白质中的氨结合,使菌体蛋白质氧化,代谢功能发生障碍。注意漂白粉腐蚀金属、棉织品,刺激皮肤,易吸潮散失有效氯而失效,平时要密封储藏,最好现配现用,不要储藏太久。

4.酒精 酒精(乙醇)具有较强的穿透力和杀菌力,它使细菌蛋白质变性。使用的浓度一般为70%~75%。处理时间15~30秒,不宜太长,因为细胞容易收缩脱水。它具有浸润和灭菌的双重作用,使用于表面消毒,但不能达到彻底的灭菌,必须结合其它药剂灭菌。 为了提高乙醇的杀菌效果,可在乙醇溶液中加入0.1%的酸或碱,以改变细胞表面带电荷的性质而增加膜透性,提高乙醇的灭菌效果。

5.高锰酸钾 高锰酸钾的灭菌原理在于它能使细菌酶蛋白中的巯基氧化成二硫基而失去酶活性。浓度稀时起氧化作用杀死细菌,日常生活中通常用作皮肤、果蔬的表面消毒剂,在一盆清水中加入几粒高锰酸钾就可起到杀菌的作用。

6.植物组织培养中脱除病毒的方法及其优缺点。

热处理是利用病毒和寄主植物对高温的忍耐性的差异,使植物的生长速度超过病毒的扩散速度,得到一小部分不含病毒的植物分生组织,进行无毒个体培育。常用的方法是将病毒感染的植物用35℃~38℃热空气处理2~4周或者更长时间进行脱毒。此法尤其适合处理生理干旱的材料和处于休眠状态的果树。热处理法中,最主要的影响因素是温度和时间。Bhardwaj等发现在热空气处理过程中,通常温度越高、时间越长、脱毒效果就越好,但是同时植物的生存率却呈下降趋势。所以温度选择应当考虑脱毒效果和植物耐性两个方面。洪霓等在梨病毒的脱毒研究中采用两种处理,一为恒温处理,温度控制在37±1℃;二为变温处理,温度为32℃和38℃每隔8h变换一次,发现变温处理比恒温处理植株死亡率低,脱毒效率高。该项技术要求的设备条件比较简单,脱毒操作也比较容易。主要缺点是脱毒时间长,脱毒不完全,例如TMV这类杆状病毒就不能用这种方法脱除,因而该方法有一定的局限性。 茎尖培养脱毒的原理是植物体内病毒靠维管束系统移动,分生组织中没有维管束存在,病毒只靠胞间连丝移动,速度很慢,难以追上生长活跃的分生组织,所以旺盛生长的根尖、茎尖一般都无病毒或很少有病毒分布。茎尖培养中最主要的影响因素就是茎尖大小,一般要求茎尖长度小于1mm。技术上通常切取茎尖越小,脱毒效果越好,但是茎尖培养成活率变低。茎尖培养脱毒法脱毒率高,脱毒速度快,能在较短的时间内得到较多的原种繁殖材料,但这种方法存在的缺点是植物的存活率低。为了克服这一缺点,现在经常是将热处理与茎尖培养相结合来使用。热处理与茎尖培养相结合之所以能够提高脱毒效果,是由于热处理可使植物生长本身所具有的顶端免疫区得以扩大,有利于切取较大的茎尖(在1mm左右),从而能够提高培养或嫁接的成活率。董雅凤等在梨树苹果茎沟病毒的脱毒技术研究中发现,梨茎尖培养比较困难,且脱毒效果差,成活率仅为28%。热处理后进行茎尖培养,成活率和脱毒率比单纯茎尖培养平均增加11.7%和54.3%。

抗病毒药剂法是一种新的脱毒方法,其作用原理是抗病毒药剂在三磷酸状态下会阻止病毒RNA帽子结构形成。常用的抗病毒化学药物有三氮唑核苷(病毒唑),5-二氢尿嘧啶(DHT)和双乙酰-二氢-5-氮尿嘧啶(DA-DHT)。这些药物常常通过直接注射到带病毒的植株上,或者加到植株生长的培养基上。这种方法一般要与茎尖培养相结合应用。经过抗病毒药剂处理的嫩茎,切取茎尖,再进行组织培养,就会提高脱毒率和成活率。采用病毒抑制剂与茎尖培养相结合的脱毒方法,可以较容易的脱除多种病毒,而且这种方法对取材要求不严,接种茎尖可大于1mm,易于分化出苗,提高存活率。有些病毒比较难去除,单独使用其中某一个方法很难获得成功,所以有人将热处理、抗病毒药剂和茎尖培养相结合使用,效果更好。

7.无病毒株系的检测方法及其原理。

1.指示植物法 当原始寄主的症状不明显时,就可用指示植物法,这是因为指示植物比原始寄主更容易表现症状。具体做法是将病叶研磨,把汁液接种到寄主植物上,对于木本植


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