植物组织培养实验中相关的问题答案(4)

2021-01-20 18:37

解答了组培中玻璃化 培养基过软等相关的问题

控制温度,适当低温处理,降低容器内相对湿度;(3)适当提高蔗糖含量,降低培养基中的水势。

(4)适当降低培养基中的细胞分裂素和赤霉素浓度,或者适当增加培养基中的Ca2+、Mg、Mn、K、P、Fe、Zn、Cu元素含量,降低N和Cl元素比例,尤其是降低氨态氮浓度,提高硝态氮含量;

(5)增加自然光照或控制温度,通过高、低温处理防治玻璃化;

(6)在培养基中添加间苯三酚、根皮苷、多效唑、矮壮素等添加物。

褐变包括酶促褐变和非酶促褐变,目前认为植物组织培养中的褐变主要是由酶促褐变引起的。酶促褐变必须具有酶、底物和氧3个条件。

由于PPO是一种含铜离子的蛋白质,因此,寻找良好的抗褐变剂可从3个方面人手:

(1)用将Cu络合掉使酶失活的物质,如植酸(PA)和乙二胺四乙酸钠盐(EDTA)等;(2)加入与酶蛋白和底物的结合部位能够结合的酶抑制剂,从而抑制醌类的产生;(3)加人能减少酚类或使醌类还原的物质,如活性碳(Ac)、抗坏血酸(Vc)、聚乙烯吡咯烷酮等。由于不同物种的PPO存在着性质上的差异,适宜不同植物抗褐变剂也会有所不同。从理论上讲,酶促褐变可以通过以下3种方法加以抑制:(1)除去引起氧化的物质——氧;(2)捕捉或减少聚合反应的中间物;(3)抑制有关的酶。

目前已在许多植物组织培养中发现有褐变现象,尤以木本植物组织培养中褐变严重。褐变现象主要发生在外植体,外植体的部位不同,取材时期不同,褐变程度亦不同,如油棕用幼嫩器官或组织,胚等作外植体进行培养,褐变较轻,而用高度分化的叶片作外植体,接种后很容易褐变。

选择适当的外植体进行预处理之后,选择适宜的培养基,在黑暗或弱光下进行培养,并在培养基中加入活性碳可以防止细胞褐变的发生和发展;在外植体接种后1~2天既转移到新鲜培养基上,使细胞在褐化之前及时转移可以大大减轻或避免褐化。


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