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D．四个平板，统计的菌落数分别是21、30、24和25，取平均值25
②一同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升 样品中的大肠杆菌数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2 mL)________。
③用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量________，因为________________ ________________________________________________________。
④某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，能否据此肯 定该大肠杆菌的品系被污染了？为什么？______________________________________。 解析 平板划线分离法是指由接种环以无菌操作蘸取少许待分离的材料，在无菌平板表 面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的 增加而减少，并逐步分散开来，经培养后，可在平板表面得到单菌落。稀释倒平板法又 分为稀释涂布平板法和稀释混合平板法。稀释涂布平板法就是将稀释后的菌液分别涂布 在固体培养基的表面进行培养；稀释混合平板法就是将不同浓度的稀释液与已溶化并冷 却至45 ℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制 成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间后即可出现菌落。在稀释度足够高的菌液里， 聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。随后挑 取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。由于大肠杆菌属于兼性厌氧菌， 为了得到更加准确的结果，最好选用稀释混合平板法。统计菌落数计算的平板越多，其 平均值越接近实际值。但是C选项中出现一个菌落数只有5个的结果，不可信，因此答
C案选D。计算公式：每克样品中的菌株数＝M，其中C代表某一稀释度下平板上生 V
长的平均菌落数，V代表稀释平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。用这 种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量多，因为当两个或多个细胞连在一起时， 平板上观察到的是一个菌落。在培养基上还有其他杂菌的菌落，其原因可能有多种，一 是大肠杆菌被污染了，二是培养基被污染了，三是培养过程中被污染了。
答案 (2)稀释混合平板法 (3)①D ②1.17×108 ③多 当两个或多个细胞连在一起 时，平板上观察到的是一个菌落 ④不能。因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过 程