土壤中含有各种微生物,怎样从土壤中分离得到产淀粉酶的芽孢杆菌?其中产淀粉酶的芽孢杆菌含量在不同土壤中含量也不同,因此实验前进行预埋工作,能使土壤中产淀粉酶的细菌含量增加。待实验前取样即可。在只用淀粉充当碳源的选择培养基中,只有能产生淀粉酶利用淀粉的菌体能成为优势菌种。在淀粉选择培养基中,产淀粉酶的菌种可以得到富集及分离。
实验前取样即可。
2、在只用淀粉充当碳源的选择培养基中,只有能产生淀粉酶利用淀粉的菌体能成为优势菌种。在淀粉选择培养基中,产淀粉酶的菌种可以得到富集及分离。
3、芽孢是菌体生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构,芽孢最主要的特点就是抗性强,对高温、紫外线、干燥、电离辐射和很多有毒的化学物质都有很强的抗性。它帮助菌体度过不良环境,在适宜的条件下可以重新转变成为营养态细胞。细菌富集一段时间后,生长环境不利,会产生芽孢,再在80-90 C温度下杀死菌体,可使芽孢得到富集。
4、菌体可经革兰氏染色后在显微镜下被判断出是否为芽孢杆菌。
5、在含有淀粉的鉴别培养基的平板上,具有产淀粉酶能力的芽孢杆菌,水解淀粉生成小分子糊精和葡萄糖,在淀粉平板上菌落周围出现水解圈,但肉眼不易分辨,滴加碘液,未水解的淀粉呈蓝色,水解圈无色。
四、实验步骤
1.样本采集
在预埋处采取土样用塑料袋装好,不要损坏土壤的内部结构。
2.目的菌株的富集
①取12.5g土壤加入250ml烧杯中,再加入112ml去离子水制成土壤混悬液,加入一小层玻璃珠。在锥形瓶中加入2g的可溶性淀粉,蛋白胨0.625g, NaCl 0.625g,调节pH值为7.0-7.2。在37摄氏度摇床培养箱中培养两天,使菌体富集且产生大量芽孢。
②在85℃-90℃水浴锅中加热10分钟,杀灭菌体,使芽孢得到富集。
3. 选择性分离
10、10、10、10, ①将菌液上清分别稀释成10、分别取菌液0.2ml 1 3 4 5 6
均匀涂布在十个含葡萄糖的淀粉培养基上,在37摄氏度培养箱培养1天,平板培养基表面便形成了若干分散的单菌落。
4、制片检测
①取其中平板培养基表面形成了若干分散的单菌落的平板,用卢戈氏碘液检测,根据有无淀粉水解圈来判断其有产淀粉酶能力,观察水解圈大小及菌落特征。