分离产淀粉酶芽孢杆菌(4)

2021-01-20 21:34

土壤中含有各种微生物,怎样从土壤中分离得到产淀粉酶的芽孢杆菌?其中产淀粉酶的芽孢杆菌含量在不同土壤中含量也不同,因此实验前进行预埋工作,能使土壤中产淀粉酶的细菌含量增加。待实验前取样即可。在只用淀粉充当碳源的选择培养基中,只有能产生淀粉酶利用淀粉的菌体能成为优势菌种。在淀粉选择培养基中,产淀粉酶的菌种可以得到富集及分离。

②挑取对照板中菌落特征相同的菌落点,通过革兰氏染色制片观察,判别所选菌落是否为芽孢杆菌。

5、纯培养

取其中是芽孢杆菌的相应菌点种落接到淀粉平板上纯培养,在37摄氏度培养1天(每一种菌接点两处进行对照)。

6、培养后观察各菌落形态特征

取其中一块板分别滴加鲁戈氏碘液,观察淀粉水解圈大小,挑取对照板中的菌落通过简单染色制片观察,判别所选菌落是否为芽孢杆菌。

7、保藏菌种

在斜面淀粉培养基的试管上标上菌株名称和接种日期后进行接种,待菌种生长完全后,至于4℃左右的冰箱中保藏。

五、时间安排

6日上午:取样

6日下午:富集培养,配制培养基并灭菌(另包括培养皿,移液管,试管等),倒平板,配制保藏菌种的培养基

8日下午:杀死菌体,稀释菌液,接种芽孢

9日下午:检测,染色制片观察,点种转接

10日下午:检验所选菌种并保藏

六、实验结果

1、稀释后接种芽孢的平板上长出分散的单菌落,滴加碘液后有变色圈,其菌落特征为扁平、边缘不整齐、白色、表面粗糙有褶皱。

2、显微图片一株为杆状,细长,中间或近似中间部位有芽孢,一株为球状, 4双生,均为革兰氏阳性(其中一株为10的平板上的菌,24h后菌落直径为9mm, 3变色圈半径/菌落半径=1.43,一株为10的平板上的菌,菌落极小,无法观察形态,但是变圈很大)。

3、 点种后的菌落形态扁平、边缘不整齐、白色、表面粗糙有褶皱,有水解圈,滴加碘液后有变色圈。

4、最终得到两株两株目的菌株。 七、分析或讨论

1、杀灭菌体时,温度控制不够好。温度应该是80-90 C10分钟,可当时我们是在70 C左右便把菌悬液放入到了水浴锅中,但是实际上,刚形成的芽孢总是处于休眠状态。热处理(如65℃放置几十分钟)可以使芽孢加速活化,提前放入水浴锅中可能使一部分芽孢刚刚萌发便被杀死,造成菌悬液中的芽孢数量减少。

2、接种时跳过10的浓度,浓度选择不够合理。稀释菌悬液时,跳过10

1 3 2 2的浓度,但是实验结果是,10的平板上菌落太多,不能准确观察,10的平板

上菌落偏少,10是最好的浓度。下次实验时应该注意在不能准确定接种的情况 2


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