病害防治
34西 南 林 学 院 学 报 第20卷
表4 复壮时间对Bacillussubtilis生物量和拮抗效应的影响
时间/d
30
60
PRS5菌株90
1203060
BS-3菌株90
120复壮前已退化PRS5复壮前已退化BS-3
未退化PRS5未退化BS-3
二级发酵的活菌数/mL
1119×1011a3170×1012b4118×1012c4120×1012c122101×1011A2176×1011A3188×1012B6119×1012C121112×10102111×10104115×1012631对R.solani的对Penicilliumspp.的
拮抗效应(48h)/%拮抗效应/%
47.0a
50.0a56.0b56.0b3210A3910B4210B4810C361001042.0a46.0a51.0b50.0b4410A5310B5510B6110C331010对B.cinerea的拮抗效应/%
28.0a35.0b40.5c41.0c5210A5810B6810C6710C2110421010注:,.
表5 不同处理方法对Bacillussubtilis回收的影响215污染率/%10-9稀释液处理:B.subtilis退化后只有
在土壤载体中才能较好地恢复活力.因此,
如何高效地从复壮载体土壤中回收“目的菌”是十分重要的问题.表5表明:在灭菌土中,不论何种处理方法,回收时均无污染.而在非灭菌土中,回收时的土壤悬液(10-9)不加热,则污染率较高(PRS5为5516%,BS-3为6616%).如在80℃水浴后再分离,污染率显著下降,且水浴时间以10～15min为宜.
不加热
灭菌土
PRS5
80℃水浴5min80℃水浴10min80℃水浴15min
010
01001001055161616010010000066162010510010
非灭菌土
不加热80℃水浴5min80℃水浴10min80℃水浴15min不加热80℃水浴5min80℃水浴10min80℃水浴15min
不加热
80℃水浴5min80℃水浴10min80℃水浴15min
灭菌土
BS-3
非灭菌土
3 讨论与结论
在微生物变异中,主要的诱变因子是
菌株本身的遗传物质所控制,但环境条件的改变也会影响不同基因型核比例的改变[10],从而引起微生物的变异.本研究显示出不同培养基、不同继代次数对B.subtilis退化产生的影响,在实验室常用的培养基中,以SDAY最适B.subtilis生长,然而两菌株在此培养基上多次继代后,其菌种稳定性存在差异.PRS5菌株在12代继代培养较稳定,而BS-3菌株在16代时尚未发生变异.说明BS-3菌株退化速度慢于PRS5菌株,这种特性可能与遗传有关.
在水果生物防腐研究过程中,筛选出某一拮抗菌及探索出发酵生产工艺后,如出现菌株退化,拮抗效应大幅度下降,从而失去生产性能和应用价值是生防工作者尚需解决的迫切问题.本研究以5种复壮载体为基础,探讨了在不同复壮时间下,上述两菌株在退化后的复壮性能,并确定“灭菌土+1%蛋白胨+1%葡萄糖+015%酵母浸膏”为最适复壮载体.复壮速度,BS-3菌株慢于PRS5菌株,分别为120d和90d.