生物学 酵母表达
维普资讯 http://www.77cn.com.cn
海峡药学也是影响因素之一 .导时间应该在 10诱 5h左右，源基因的外表达才能达到最高，有些菌表达时需要诱导 2 0而 0 h以上 .过
20 0 7年
第 1 9卷第 2期
p值 .此低 p不会影响其生长，止目的蛋白降解。此 H因 H防外，可通过共表达蛋白酶抑制物来抑制蛋白酶活性，少目的减
短的时间 (d表达量很低，长的时间外源蛋白的降解增加， 3)过因此寻求一个最佳产量时间比就特别重要。邱荣德 ( 9 9的 19 )
蛋白降解；将目的蛋白与一种在 P ps r可 . at i稳定的蛋白 o s中伴侣融合表达，过改变目的蛋白的性质来提高稳定性；通 也可尝试将目的蛋白连上一个过氧化物酶体靶向信号 ( eo i ma agt gin1P S,其被分拣转运人过氧化 p rx
s l rei s a. T )使 o t n g
报道认为，果用两步法来诱导外源蛋白的表达，诱导时的如则起始 p可能是毕赤酵母高效表达重组蛋白的关键之一， H通过改变诱导时的 p值，使表达量提高 5以上“。在培 H可 0”养基中添加特殊的营养物质，提高一些特殊蛋白的表达水能平 .添加限制氨基酸以及表达含有金属的酶时在培养基中如
物酶体贮存起来，受蛋白酶降解，可减少对宿主细胞的毒免还害作用 n ¨" ¨ 。随着毕赤酵母表达体系的日益成熟， rI一、h象 h L 2 rGH、人
添加金属元素。” 。5 2通过提高菌株的生物密度来提高外源蛋白表达量采 .
血清蛋白等许多生物制品已在该系统成功表达，要得到高但表达，生产工业化，得高利益，有一段很长的路要走。使获还参考文献 (3翔 .克克，育阳， 1赵霍李毕赤酵母的密码子用法分析 (3 J .生物工程学报，0 0 1 ( ) 3 8 3 1 2 0 .6 3:O~ 1 .
用不同的培养基配方和不同的发酵参数，过提高细胞的绝通对总数来提高外源蛋白的产量。影响 P psoi生长的外界 .atr s
因素主要包括：1培养基组成。 ()目前主要有 B Y、 B MG F S2种培养基可用于培养 P psoi .atr。但由于 B Y既含有磷酸缓 s MG冲液又含蛋白胨和酵母提取物，因而菌株生长更好，大增加大了生物量，表达量也相应大大提高。如在表达 mE F时，使 G在
( 3秀玉，恂 .坚 .毕赤氏酵母 P 2戴王周 AOX 2突变化序列分析 (3 J.微生物学报，9 93 ( )5 9 5 1 1 9, 96:5~ 6 .
(3东宋，宋平 .敏 .源蛋白在巴氏毕赤酵母中高效表达的策 3聂梁李外略 (3 J.吉首大学学报 (自然科学版 )2 0 .2 3:O ., 01 2 ( )4~4[ 4]Oh s i a hR,M o hiu E,Ka s i Y. g lv l x rsin f h c z ki mo ht a Hih— e e p eso o t e eme h n li d cb e b t· lc o i a e g n y p r u in c lu e o t a o·n u
i l e a- a t sd s e e b e f s u t r f - ga o r c m bna tPih a p t rsu i g a s a n c r mi m b a e f s e o i n c i a o i sn h ke e a c me r n l k s a
B Y培养基中单拷贝转化子表达量为 2 g MG 0 g·L 而在不 _,含蛋白胨和酵母提取物的基本培养基中表达量少于 lg· u L。但 Y _, NB价格相对较高，以工业上用 F S是个不错的所 B选择。白胨和酵母提取物中几乎不含大分子蛋白质，有分蛋只
[] J u n l f eme tt n& Bo n ie r g 1 9, 6 1: 4 J . o r a o r nai F o i gn ei, 9 8 8 ( ) 4~ e n4 . 8
子量低于 3 0Da的小分子多肽，此对于大分子外源蛋白 00因的分离纯化不会造成不便。 2诱导前菌体 O值。 .atr () D P ps i os
[5] Viat F, Hu en AS, B c ma o l te l s i a h n TT . p e in lv l o Ex rs o e e fh t r lg u r t i s n Pih a Pa t rs s n l e c d y ls e e oo o s p o e n i c i s o i i i fu n e b fa k
中蛋白表达分 2阶段：是生长阶段，含甘油的培养基培个一在养菌体；是诱导表达阶段，入甲醇到培养基中诱导表达。二加一
d s n J . p co il i e h o 2 0, 5 4 3 4 5 e i[] Ap l g Mi bo Bo c n l 0 1 5: 6~ 6 . r t [6] W o d o M J,Ko v s mie E A. o u to o lr q a ie o Pr d cin f age u ntt s f i
般来说， D。越高，物量越大，总的表达量亦应该越 O值。生则
高.是 O 值越高培养基中氧和营养供给越受限制，且但 D。。而外源蛋白的溶解性、定性、性都会对菌体产生影响。稳毒因此， 高密度并不一定意味着高表达。
ioo ial a ee r tii Piha Pat rs b fr ntt n[] s tpc l lb ld p o enn c i s o i y eme ai y o J.
J u n
l fBimoeua o r a o lc lrNM R, 9 9, 3 2 1 9 1 9 o 1 9 1 ( ): 4~ 5 .
( 3 o p Ano c D u u o btl san n r p e ig 7 Th r E D, ju M, a g lsA J S r i o - e rs n e i oac r o s u c f re— a c f r e t to o r c m bn n Pi h a a b n o r e o f d b t h e m n a in f e o i a t c i
5 3防止目的蛋白降解 .
外源蛋白的稳定性直接影响到基
p so i( 3 oe h oo y Letr, 9 9, 1 8 6 9 6 2 at rc J Bit n lg te s 1 9 2 ( ): O~ 7 . c( 3 ah M o hz k Su u A ni c l s rduto n 8 Oh s iR, c iu i E, zki T. mi— aema sp o cin a d ss p r to s s e o s c e o y e e o o u p o e n y e f s n e a a in y t mf r e r t r h t r lgo s r t i s b p r u i o c lu e ut r of e o bn n Pih a a t rs u i g a s a e c r mi r c m i a t c ip s o i sn h k n e a c
因表达的产量。乎没有一种高表达蛋白是特别稳定的，主几宿
菌内蛋白酶水平决定着表达产物的降解速度。高密度培养酵母固然可以大大提高培养基上清中分泌外源蛋白的含量，但随着重组蛋白的分泌增加，它一些细胞内物质如蛋白酶亦其
me rn l k[] o r a o i i c￣Bo n ie r g 1 9, 7 mba e f s J J u n l fB o e e i gn ei, 9 9 8 a c s n e n(: 5~ 6 0 5) 6 5 6. ( 3 l gs Erd 9 Hel . o eLRa e wi vn NP, ta . ay i fsn l— h i n io e 1 An lsso igec an a tb dyp o c in i c ip so i sn ·i e me h n lc n r li e· r du to n Pih a a t rs u i g On- n t a o o t o n f d l
会分泌增多，在培养基中积累从而造成对重组蛋白的降解，尤其是小分子肽更易受到蛋白酶
(中性 p条件下容易产生 )在 H的影响。了提高外源蛋白在发酵液中的稳定性，受蛋白酶为免
降解，采有以下几种方法： .造 P psoi表达宿主菌可一改 .atr s株，失基因组中主要蛋白水解酶的基因，目的基因稳定。缺使
b t h a d mie—ed fr n ain (3 Bit h o o n 2 01 74 ac n x fe eme tto s J . oe n lBie g, 0, d c(:4 . 4) 3 4
或使用已有的蛋白酶缺陷菌株如 S MDl 6,可避免产物降 18亦解的发生。在培养液中补加一些富含氨基酸的组分和酪蛋二.白水解物、胃蛋白水解物，在培养基中加入 YP(母提取或酵物+蛋白胨 )提供给酵母细胞蛋白酶过量的底物，减少目，以
( O la . eg e M . eef to t n l n c tt n p oen I 3n nM M a h rM Th fe feha o d aea eo r ti c a
e p esn C 3 o c i o n 2 0 9 3 9 x r sig J JBiso e g, 0 1, 2} 2· Bi
(1邱荣德，建蓓，垒等. p 3蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达 I3朱王人 5(3 J生物工程学报，9 9 1 ( ) 4 7 4 1 1 9,5 4:7~ 8 .[1 1]Bi H .Ch g D A,S miaha S,e a Ex r sin n s ht uh wa n t n t l p e s a d op df a i n o ng e v r s t p n e o e p o en a e a ii u i t fDe u iu y e 2 e v lp r t i s a h p t s c o t
的蛋白的降解；如，报道在 p .缓冲培养基中加 1例有 H6 0的的 C smi ai aa n c s可以抑制细胞外蛋白酶，得鼠表皮生长因 o d使 子的产量提高。;加 5添 mME TA到培养基中，可以提高 D也
B s ra ea tg n i ihap sor(3. o en Ex rPu i, 0 1, u fc n ie n Pc i at iJ Pr ti p rf 2 02 8~ 9 . 3: 4 6
产品的稳定性，但常会使一些不明显的蛋白变成明显的蛋白。 三 .赤酵母在非缓冲培养基中生长表达， p降到 3
或更毕将 H低，得许多中性 p蛋白酶失活，于毕赤酵母能对抗低使 H由·6‘
[]Po e Y a d, a Do ad Co e tt t .S n h ss o 13 M r Err N M c n l— mb r Peeo J y t ei f p lh dox aka o t i t e eo s me f c i p so i[ . oy y r y l n ae n h p rxi o o Piha at rs J]FEM S M ir b o t . 0 2, 0 9~ 1 2 co il Le t 2 0 2 7; 7 O.