噬菌体展示技术在靶向性细胞膜穿透肽鉴定中的应用
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生物技术2014年24（5）
金森综合症和阿尔茨海默尔综合征的治疗研究中，人们试图使用一些脂溶性药物通过血脑屏障，但仍受到药物颗粒大小的限制
［29］
tratingpeptides［J］.LettersinBiotechnology，2012，23（1）：142－147.［5］朱有葱，曾焱华.噬菌体展示技术在疫苗研究中的应用进展［J］.2014，42（1）：51－55.微生物学免疫学进展，
ZhuYoucong，ZengYanhua.Applicationandprogressofphagedisplaytechnologyinthevaccineresearch［J］.ProginMicrobiolImmunol，2014，42（1）：51－55.
［6］张文倩，李华琴.噬菌粒载体在噬菌体展示中的应用和研究进展［J］.生物技术，2014，24（1）：96－100.
ZhangWenqian，LiHuaqin.Applicationandprogressofphagemidvectorinphagedisplay［J］.Biotechnology，2014，24（1）：96－100.
［7］TuXiangan，ZangLinquan，LanDaiyan.etal.Screeningandidentifi-cationofapeptidespecificallytargetedtoNCI－H1299cellsfromaphagedisplaypeptidelibrary［J］.MolMedＲep，2009，2（6）：1005－1010.［8］HuiXiaoli，HanYu，LiangShuhui，etal.Specifictargetingofthevas-culatureofgastriccancerbyanewtumor－homingpeptideCGNSNPKSC［J］.JControlＲelease，2008，131（2）：86－93.
［9］KragDN，ShuklaGS，ShenGP，etal.Selectionoftumor－bindinglig-andsincancerpatientswithphagedisplaylibraries［J］.CancerＲes，2006，66（15）：7724－7733.
［10］LarimerBM，DeutscherSL.Developmentofapeptidebyphagedis-playforSPECTimagingofresistance－susceptiblebreastcancer［J］.AmJNuclMedMolImaging，2014，4（5）：435－447.
［11］MarutaF，AkitaN，NakayamaJ.etal.Bacteriophagebio－panninginhumantumourbiopsiestoidentifycancer－specifictargetingligands［J］.JDrugTarget，2007，15（4）：311－319.
［12］WangHu，ZhongChunyan，WuJiangfeng.etal.EnhancementofTATcellmembranepenetrationefficiencybydimethylsulphoxide［J］.JControlＲelease，2010，143（1）：64－70.
［13］ZahidM，PhillipsBE，AlbersSM.etal.Identificationofacardiacspecificproteintransductiondomainbyinvivobio－panningusingaM13phagepeptidedisplaylibraryinmice［J］.PLoSOne，2010，5（8）：e12252.
［14］DerdaＲ，TangSK，LiSC，etal.Diversityofphage－displayedlibrar-iesofpeptidesduringpanningandamplification［J］.Molecules，2011，16（2）：1776－1803.
［15］KankiS，JaaloukDE，LeeS，etal.Identificationoftargetingpeptidesforischemicmyocardiumbyinvivophagedisplay［J］.JMolCellCardi-ol，2011，50（5）：841－848.
［16］WhitneyM，CrispJL，OlsonES，etal.Parallelinvivoandinvitrose-lectionusingphagedisplayidentifiesprotease－dependenttumor－targetingpeptides［J］.JBiolChem，2010，285（29）：22532－22541.
［17］PachoriAS，MeloLG，HartML，etal.Hypoxia－regulatedtherapeu-ticgeneasapreemptivetreatmentstrategyagainstischemia/reperfusiontis-sueinjury［J］.ProcNatlAcadSciUSA，2004，101（33）：12282－12287.
［18］KawanoS，KubotaT，MondenY.etal.BlockadeofNF－kappaBim-provescardiacfunctionandsurvivalaftermyocardialinfarction［J］.AmJPhysiolHeartCircPhysiol，2006，291（3）：H1337－1344.
［19］LaakkonenP，AkermanME，BiliranH，etal.Antitumoractivityofahomingpeptidethattargetstumorlymphaticsandtumorcells［J］.ProcNatlAcadSciUSA，2004，101（25）：9381－9386.
［20］SunS，SchillerJH，SpinolaM，etal.Newmolecularlytargetedthera-
。这就迫切需要找到可以自由穿过血脑屏障的药
［30］
物递送工具。IngevanＲooy等运用噬菌体随机15肽库淘［31］
选出了两条可以特异穿透血脑屏障的多肽。LiJingwei等
使用环7肽噬菌体，淘选出了具有高度脑亲和力的新型CPP，该多肽环形结构使其对神经细胞的识别更加准确和高效灶部位，起到治疗中枢神经系统疾病的目的。
［31］
。
靶向神经细胞的CPP可以携带药物分子穿过血脑屏障直达病
3
3.1
展望
展示多肽库容量与多样性有待提高
研究者发现在淘选过程中噬菌体展示多肽库的多样性和
容量是影响候选肽与靶分子之间亲和力、淘选效率的主要因素
［32］
。通过对不同DNA片段的随机重组增大肽库容量与多展示多肽库表达水平的提高
样性，将在很大程度上提高筛选目的多肽的概率。3.2
随着对噬菌粒载体的改造，研究者发现有些插入外源多肽的噬菌粒载体更便于扩增。但是，由于这些噬菌粒载体基因的不稳定性与融合的外源多肽表达水平低而鲜少被应用于生物淘选中。理论上，通过插入强的启动子可以提高外源多肽表达水平，但是这会对宿主菌的生存产生影响。Jean－LucJestin
［33］
为了提高Taq等在构建噬菌粒展示多肽库的过程中，
DNA聚合酶的Stoffel片段的表达产率，对信号肽序列区域进行改进从而增加外源多肽、蛋白的转录与翻译调控，发现可以使外源多肽、蛋白的表达提高50倍。
4总结
随着科研工作者针对不同的研究目的对噬菌体进行不断
的优化和改进，噬菌体展示技术不断发展，并逐渐成为理想的生物淘选工具。目前有待解决的问题是针对不同研究目的，选择不同体系的噬菌体展示技术才能达到最佳的效果。因此需要通过了解不同噬菌体的遗传背景和作用机制来改造噬菌体，从而达到更为理想的淘选目标。可以预见，随着噬菌体展示技术在淘选特定细胞靶向性CPP的广泛应用，将会有越来越多的不同细胞靶向的CPP被筛选、鉴定，为新一代的靶向治疗和个体化治疗提供更多、更好的药物运载工具。
参考文献：
［1］SmithGeorgeP.Filamentousfusionphage：novelexpressionvectorsthatdisplayclonedantigensonthevirionsurface［J］.Science，1985，228（4705）：1315－1317.
J］.中［2］张谢，赵应征，赵钢涛.细胞穿膜肽在癌症治疗中的应用［2011，20（10）：881－884.国新药杂志，
ZhangXie，ZhaoYingzheng，ZhaoGangtao.Applicationofcell－penetrat-ingpeptidesincancertherapy［J］.ChineseJournalofNewDrugs，2011，20（10）：881－884.
［3］ZahidMaliha，ＲobbinsPaulD.Cell－PenetratingPeptides［M］.NewYork：HumanaPress，2011：277－289.
［4］陈翀，季守平.穿膜肽的研究现状及应用［J］.生物技术通讯，2012，23（1）：142－147.
ChenChong，JiShouping.Ｒecentproceedingandapplicationofcell－pene-