Vol.27
2006年8月高等学校化学学报 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES No.81456～1458
[研究简报]
改进的PMP柱前衍生化方法用于
单糖的组成分析
林 雪,王仲孚,黄琳娟,白 泉,贾敬芬
共建教育部重点实验室,2.分离科学研究所,西安710069)
关键词 HPLC;12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP);衍生化;糖
中图分类号 O658 文献标识码 A 文章编号 025120790(2006)082145620311121(1.西北大学生命科学学院,陕西省生物技术重点实验室,西部资源生物与现代生物技术省部
单糖组成分析是糖结构分析的一项重要内容.上紫外或荧光基团,用HPLC进行分离,,、进样量少、检测限低及多模式等特点.
PMP(12苯基232甲基252吡唑啉酮)NaOH溶液中[1～3],LC的检测及分析,但会降低质谱检测的灵敏度,,这样不仅简化了衍生化反应的后处理过程,,省去了质谱分析前的脱盐处理过程.本研究建立了5种常见单糖的分析分离模式,对其进行质谱分析,用所建立的方法对标准二糖及3种多糖样品中的单糖组成进行了分析,取得了满意的结果.
1 实验部分
1.1 仪器与试剂 Waters269522996型高效液相色谱仪,色谱柱(SymmetryC18,5μmi.d.,319mm×150mm,美国Waters公司);基质辅助激光解析电离质谱仪(MALDI2TOF2MS,日本岛津公司).
12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP)、鼠李糖(Rha)、木糖(Xyl)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、乳糖(Lac)及三氟乙酸(TFA)(分析纯,上海医药集团);乙腈(色谱纯,Fisher公司);氢氧化钠、醋酸铵、冰醋酸及三氯甲烷(分析纯,天津化学试剂厂).
螺旋藻多糖样品SPPA21,SPPB21和SPPC21为本实验室提取、纯化.
1.2 实验过程 (1)衍生化标记.以氨水作碱液对样品进行标记:分别称取甘露糖、葡萄糖及半乳糖各010180g,鼠李糖010164g,木糖010150g,溶于5mL氨水中,取该溶液100μL,与100μL的PMP/甲醇溶液(015mol/L)混合,在70℃下反应30min.取出后冷却至室温,加入115mL纯水,真空[4,5]干燥,重复2次.干燥后的物质用1mL纯水及1mL氯仿溶解,充分振荡后除去有机相,重复3次.水相溶液以13000r/min的速度高速离心2min后,用水稀释20倍,进行HPLC分析.
(2)标准双糖与多糖的水解.分别称取乳糖及螺旋藻多糖SPPA21,SPPB21及SPPC21各2mg,加入2mol/L的TFA溶液1mL,封管,于121℃水解2h后,将样品真空干燥.
(3)标准双糖与多糖水解物的衍生化及分析.将水解后的乳糖与多糖按上述衍生化方法进行衍生收稿日期:2005212202.
基金项目:国家重点基础研究发展计划项目(批准号:2004CB520802)和陕西省重点实验室重点科研发展计划项目(批准号:05JS49)资助.
联系人简介:王仲孚(1971年出生),男,博士,副教授,从事糖生物学与糖工程学研究.E2mail:wangzhf@