后抽滤，污水样500毫升，根据悬浮物的多少：一份水样需更换数张滤膜，将同一份水样滤膜集中于小烧杯内，用4%硫酸溶液反复冲洗，处置30分钟后，收集洗液于离心管中，3000转30分钟离心，弃去上清液，沉淀物中加1毫升灭菌生理盐水混合均匀后，供接种用。
2 离心集菌法：水样500毫升，分装于50毫升或200毫升灭菌离心管中，3000转30分钟离心，同一份水样的沉淀物集中于试管内，加等量4%硫酸处理30分钟，供接种用，如体积过大再次离心浓缩后接种。
二、接种：
上述集菌液全部接种于改良罗氏培养基或接种于小川氏培基上，每支培养管接种0.1毫升。
三、培养：
置37℃恒温培养箱，培养8周，2周后开始观察结果，每周观察2次。
分离菌株罗氏培养基上呈淡黄色或无色，粗糙型菌落；作抗酸染色，阳性者作分离传代。菌型鉴别分离传代菌株如生长速度在二周以上，则需作菌型鉴别；应用耐热触酶试验和传代培养于28℃培养箱2～4周观察是否生长，用此两种方法即可进行初步鉴别。
四、致病力试验
耐热触酶反应阴性，28℃不生长之菌落为可疑结核杆菌。于小白鼠尾静脉接种1毫克菌量（5毫克燉升菌液，每只动物接种0.2毫升）死亡时观察病变或8周后解剖脏器发现典型结核病变者可确认为检出结核杆菌。其耐热触酶试验方法如下：
（一）材料
1 pH＝7.0磷酸缓冲液（M/15）
2 10%吐温（TWeen）80水溶液加等量30%H2O2。
（二）方法
1 取菌落3～5毫克分散于0.5毫升磷酸盐缓冲液中。
2 置68℃水浴中20分钟。
3 冷却后加吐温80和H2O2混合液0.5毫升。
（三）结果
发生气泡为阳性，30分钟不产生气泡者为阴性。人型、牛型结核杆菌，胃分枝杆菌和海鱼分枝杆菌为阴性，其它非典型抗酸菌和非致病抗酸菌为阳性。