取谷氨酸发酵液于11400 r/ min 离心5 min,取上清液弃去菌体,用蒸馏水稀释10 倍,调节pH 5. 5~6后备用。 发酵样品谷氨酸含量检测
取3 mL预处理好的发酵液加入18 mm ×180 mm 玻璃试管中,调整发酵液PH在5.5左右,沿试管壁加入0. 5 mL茚三酮试剂,塞上PVC 胶塞。将试管中液体振匀,置于试管架中,将试管架迅速置于80℃水浴中加热15 min。快速取出保温到时的试管,再将试管架插入冰浴锅中,冷却5min 。到时间后,混匀,将分光光度计波长调至569 nm 处,以10 倍稀释的空白液体发酵培养基为空白对照,测出OD569值。
注意事项:
菌种污染势必导致发酵的失败,轻者产酸下降,严重的不积累产物,因此,在菌种制备的整个过程中,都要树立起牢固的无菌概念,工作力求细致、到位。
标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行,一起显色和比色。
实验数据及处理:
1.葡萄糖标准曲线:
表1 葡萄糖标准液的吸光值 葡萄糖葡萄糖葡萄糖葡萄糖蒸馏水蒸馏水管号 标准液含量OD540 管号 标准液含量/ml /ml /ml /mg /ml /mg 0 1 2 0.0 0.2 0.4 1.0 0.8 0.6 0.00 0.000 0.08 0.016 0.16 0.061 3 4 5 0.6 0.8 1.0 0.4 0.2 0.0 OD540 0.24 0.122 0.32 0.168 0.40 0.215 由以上数据可以做出葡萄糖标准曲线如下:
2.样品中还原糖含量的测定:
由原始数据得出发酵过程中还原糖含量变化数据如下表: T/h OD540 4 0.811 6 0.740 8 0.533 10 0.423 12 0.452 14 0.480 16 0.463 22 0.170
再由上表绘制得发酵过程中还原糖含量随时间变化图像如下:
3.谷氨酸标准曲线:
表:谷氨酸标准液吸光值: Vglu/ml 0 OD 0
0.354 0.708 1.062 1.416 1.770
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 OD Linear Fit of Sheet1 ODEquationy = a + b*xOriginPro 8 Evaluation由以上数据可以做出谷氨酸标准曲线:
2.0WeightOriginPro 8 EvalNo WeightinguationOD569Residual Sum of SquaresAdj. R-Square1.14015E-311ValueStandard ErrorOriginPro 8 Evaluation-1.11022E-161.22191E-163.544.03582E-161.5OriginPro 8 EvaluationODInterceptODSlopeOriginPro 8 EvaluationOriginPro 8 Evaluation1.0OriginPro 8 EvaluationOriginPro 8 Evaluation0.5OriginPro 8 EvaluationOriginPro 8 EvaluationOriginPro 8 EvaluationOriginPro 8 Evaluation0.00.00.20.40.6Vglu/ml
4.样品中谷氨酸量的测定:
由原始数据得出发酵过程中谷氨酸含量变化数据如下表: T/h 谷氨酸含量569 2 --- 4 --- 6 --- 8 --- 10 --- 12 14 16 18 20 22 24 0.283 0.292 0.248 0.261 0.342 0.386 ---
再由上表绘制得发酵过程中还原糖含量随时间变化图像如下:
讨论:影响谷氨酸发酵的主要有生物素、供氧浓度、铵根浓度、碳源、碳氮比、发酵温度、PH值、泡沫、发酵时间的控制。谷氨酸发酵对环境控制的要求很高,实验过程主要为对其的控制。
参考文献
1.微生物工程 曹军卫 马辉文 编著