淀均为白色。
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四、结果与讨论
实验过程中的现象:
加样时:把饱和硫酸铵加入到血清后观察到溶液浑浊。 溶液下层呈米黄色,上层呈淡黄色。 离心后溶液分层为:
下层为沉淀,呈乳白色。上层为清液,呈淡黄色。
原始实验数据:
将4条经过染色的醋酸纤维素薄膜并列,使点样线位于同一水平。以正常血清蛋白图谱为对照,观察提纯的物质属哪种蛋白。所得的照片如下图:
结果:从电泳图谱中可以看出,血清样品的电泳分离情况并不理想,除清蛋白外,α1-球蛋白、
α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白这4条区带未能清晰分离。对于清蛋白第1管和清蛋白第2管,其电泳结果与血清的清蛋白电泳图谱几乎一致,可以确定管内的蛋白质为清蛋白,同理球蛋白管内的蛋白质为γ-球蛋白。
讨论: 1,对于血清样品的电泳图谱中4条球蛋白区带分离情况不佳的情况,其可能为在滴加 血清样品时滴加过多,使得球蛋白的4条区带彼此靠近而导致分离情况不佳的情况发生。 2,对于清蛋白管和球蛋白管中区带颜色浅的情况,其可能为提纯操作中滴加洗脱液过多导致 血清蛋白稀释过度,导致收集的提纯蛋白溶液的蛋白浓度降低而使得电泳所得区带颜色较浅。 3,对于清蛋白1管中清蛋白区带弯曲的情况,其可能为未水平点样或电泳时薄膜为放正所致。 结论:本次试验所获得的结果除血清样品的电泳图谱外基本与预期试验结果相一致。 思考题:
1.硫酸铵盐析一步,为什么是0.8ml血清加0.8ml饱和硫酸铵?
答:因为清蛋白和球蛋白的盐析浓度不一样,使用半饱和硫酸铵溶液可以使球蛋白沉淀而清蛋
白不沉淀,0.8ml血清和0.8ml饱和硫酸铵混合可以形成半饱和硫酸铵溶液从而达到分离的目的。
2.为什么实验中DEAE纤维素柱分离γ-球蛋白后不用再生,可直接用于纯化清蛋白?
答:因为缓冲液相同并且分离球蛋白后DEAE纤维素柱的成分没有发生改变,可以继续用于纯化
清蛋白。
3.应用醋酸纤维素薄膜电泳鉴定分离纯化后的血清清蛋白和γ-球蛋白的纯度,根据什么来确定它是清蛋白还是γ-球蛋白?判定它们纯度的依据是什么?
答:根据各自的电泳图谱与正常血清蛋白图谱作对照来确定它是清蛋白还是γ-球蛋白。判定它们纯度的依据是染色后颜色的深浅,深的说明纯度高,浅的说明纯度低。