毕 业 论 文
题目：大鼠肝脏细胞表面和心肌细胞表面生长激
素受体的检测
学 院： 中国农业大学 专 业： 动物医学 年 级： 2013级 姓 名： 层 次： 专升本 学习形式： 函授 指导教师： 何丹
（2015 年 5 月） 中国农业大学教务处制
大鼠肝脏细胞表面和心肌细胞表面生长激素受体的检测
摘要: 生长激素具有促进生长，促进骨、软骨、肌肉和其他组织细胞的分裂增殖和蛋白质的合成，从而加速骨骼、肌肉和器官的生长发育。而生长激素要发挥作用往往通过靶细胞表面的受体来实现，通过生长激素与受体的结合来触发细胞的分裂信号以及蛋白质合成等一系列信号，从而实现细胞的基础代谢以及细胞的分裂增殖。肝细胞是一类复制较为活跃的细胞，根据实验得到的数据，肝脏在切去2/3后患者仍能存活并且剩余的肝脏在一段时间后能够长成完整的肝脏组织。而心肌细胞则基本不复制，当心肌细胞受损后剩余的心脏组织不能通过复制来弥补缺损的部位，只能通过干细胞分化为一般的纤维细胞来弥补。所以我们推断肝脏细胞表面的生长激素受体的含量要高于心肌细胞表面的含量，因此我们用免疫组化的方法来检测生长激素受体在这两种细胞表面的含量。
关键词：生长激素；生长发育；肝细胞；心肌细胞；免疫组化
Detection of Growth hormone Receptor on Liver cells and
Myocardial cells
Abstract: Growth hormone has a lot of functions such as promoting growth, promoting the synthesis of bone, muscle and other tissuecells and proteins, thus accelerating the growth and development of bone, muscle and organs. Thegrowth hormone play its role by binding to the growth hormone receptor to trigger cell division and protein synthesis signal and a series of signals, enabling cell proliferation and cell basal metabolism. Liver cells are a class of cells replicating more active, according to the experimental data obtained in the liver of patients,liver can survive evenit is cut two-third and the remaining 1/3 of the liver can grow into a complete liver tissue. Myocardial cells can not replicate, when it is destroyed,it can not be restored to its original state. The defect organization can be compensated by Fibroblasts. Accordingly, we concluded that the content of the liver cell surface receptors of growth hormone is more than the myocardial cell surface, so we used immunohistochemistry to detect growth hormone receptors on the cell surface of these two organs.
Key words : Growth hormone; development; liver cell; myocardialcell; immunohistochemistry
目 录
1 绪论 .............................................................. 1 1.1 生长激素 ........................................................ 1 1.2 免疫组化 ........................................................ 1 1.3 免疫组化的标本 .................................................. 2 1.4 所用的抗体 ...................................................... 3 1.5 常用染色方法 .................................................... 3 1.6 多克隆抗体 ...................................................... 3 2 石蜡切片制作实验 .................................................. 4 2.1 准备工作及试剂 .................................................. 4 2.2 石蜡切片的制作过程 .............................................. 6 3 免疫组化实验 ...................................................... 8 3.1 实验器材与试剂 .................................................. 8 3.2 实验步骤 ........................................................ 9 4 实验结果 ......................................................... 10 4.1 心肌细胞免疫组化结果 ........................................... 10 4.2 肝脏细胞免疫组化结果 ........................................... 10 5 结论与分析 ....................................................... 11 结论
12
致谢 ............................................................... 13 参考文献 ........................................................... 14
中国农业大学 大鼠肝脏细胞表面和心肌细胞表面生长激素受体的检测 第 1 页 共15页
1 绪论
1.1 生长激素
生长激素（human Growth Hormone,hGH）是腺垂体细胞分泌的蛋白质，是一种肽类激素。通过重组DNA技术制造的生长激素简称r-HGH。正常情况下，生长激素HGH呈脉冲式分泌，生长激素（hGH）的分泌受下丘脑产生的生长激素释放素(GHRH)和生长激素抑制激素（GHIH，也称生长抑素SS）的调节，还受性别、年龄和昼夜节律的影响，睡眠状态下分泌明显增加。生长激素的主要生理功能是促进神经组织以外的所有其他组织生长；促进机体合成代谢和蛋白质合成；促进脂肪分解；对胰岛素有拮抗作用；抑制葡萄糖利用而使血糖升高等作用。生长激素分子是由191个氨基酸残基构成，相对分子质量22124道尔顿。分子构造具有4个α螺旋使生长激素分子结构可以和其受体有良好结合。就蛋白质序列上来说，生长激素和泌乳激素以及绒毛膜促乳素在演化上同源。
生长激素发挥作用依赖于细胞表面的生长激素受体，生长激素与生长激素受体结合后启动一系列的DNA复制、蛋白质合成以及细胞分裂的信号，从而实现细胞的复制。生长激素自腺垂体分泌后随血液到达身体各个组织器官发挥作用。由于各个组织器官细胞的分裂活性不同，因此各个组织器官细胞表面的生长激素受体的含量也不同。本实验旨在通过免疫组化的方法来检测肝细胞和心肌细胞表面的生长激素受体的含量。
石蜡切片是组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。教学中，光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败，失去原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。
1.2 免疫组化