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8) 二甲苯浸泡30分钟。
9) 二甲苯浸泡30分钟。
2.2.5浸蜡包埋
浸蜡的全过程应在恒温设备中进行，将恒温箱调至58℃。然后将组织浸没于二甲苯与石蜡的混合液（体积比为1:1），时间为1小时，之后用石蜡浸泡1小时，然后再用新的石蜡浸泡1小时，浸蜡必须彻底，否则组织内残留透明剂会造成切片过程的困难和影响切片的质量。
准备包埋蜡：先用软蜡（50°-52°），再用硬蜡（60°-62°为好），所用的石蜡要求透明无杂质，新的石蜡要反复熔凝，并有一定的韧性，可以加一些蜂蜡。蜡的熔点应与组织的硬度相适应，包埋用过的石蜡可以反复使用。
准备包埋框：用金属作为包埋框。
点燃酒精灯：准备好镊子，应事先做好标记。
在金属框中倒入硬蜡，然后将组织放入石蜡中，可室温下冷却。
包埋框内的蜡逐渐凝结，若表面已经形成一层固体状，即可放入冷水中加速其凝固。
待蜡块完全凝固以后，便可拆卸包埋框架，取出蜡块。 2.2.6切片
包埋后的组织块经修整后，用切片机切成5-7μm的石蜡带。 2.2.7粘片
将组织石蜡带在36摄氏度的温水中展片，然后用经1%HCl溶液处理干净的载玻片捞片，组织带即可粘在载玻片上。 2.2.8烤片
将粘好的载玻片置于60℃左右的温箱中烤干，待2-3小时后，即可取下编号。
2.2.9 H-E染色
1) 用新鲜的二甲苯浸泡切片1小时。 2) 用新鲜的二甲苯浸泡切片1小时。 3) 100%酒精浸泡5分钟。 4) 100%酒精浸泡5分钟。
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5) 95%酒精浸泡5分钟。 6) 95%酒精浸泡5分钟。 7) 85%酒精浸泡5分钟。 8) 75%酒精浸泡5分钟。 9) 蒸馏水冲洗1分钟。
染色：
1) 苏木精染色5分钟。 2) 蒸馏水冲洗1分钟。 3) 盐酸酒精分化15秒。 4) 自来水洗15分钟。 5) 蒸馏水洗1小时。 6) 0.5%伊红染色1分钟。 7) 95%酒精浸泡5分钟。 8) 95%酒精浸泡5分钟。 9) 100%酒精浸泡5分钟。 10) 100%酒精浸泡5分钟。 11) 二甲苯浸泡5分钟。 12) 二甲苯浸泡5分钟
2.10 封片
中性树胶封片:取中性树胶滴入载玻片的组织上，取盖玻片从一端逐步盖下去，避免发生气泡。
3 免疫组化实验
3.1 实验器材与试剂
1) 0.01M的磷酸盐缓冲液 2) 多聚赖氨酸 3) 梯度酒精 4) 二甲苯 5) 柠檬酸盐缓冲液
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6) 3%的双氧水
7) 用PBS溶解的含有1%的牛血清白蛋白的封闭液 8) 15%-30%的蔗糖溶液 9) EDTA或者Triton X-100
3.2 实验步骤
1) 将肝脏组织和心脏组织石蜡切片放置在60℃恒温箱中烘烤30分钟。 2) 脱蜡和水化：二甲苯(20min)→二甲苯(20min)→无水乙醇(5min×2次)
→95%乙醇(5min×2)→90%(5min)→80%乙醇(5min) 3) 蒸馏水冲洗1次时间为5min，PBS洗2次每次各5min。
4) 抗原修复：一般选用微波修复中火6min，共修复4次，效果不错，修复
后自然冷却30min左右。
5) 蒸馏水洗1次时间5min，PBS洗2次每次各5min。
6) 加3%双氧水孵育30min(室温)以消除内源性过氧化物酶的活性。 7) PBS洗3次每次各5min。
8) 加蓝色试剂（蓝色试剂为封闭液，成分为用PBS稀释的10%的山羊血清），
室温孵育30min，倾去，勿洗。
9) 滴加一抗（抗生长激素受体的抗体），37℃孵育2h。 10) PBS冲洗3次每次各5min。
11) 滴加黄色试剂(生物素标记的二抗溶液)，37℃孵育30min。 12) PBS洗3次各5min。
13) 滴加试剂C(辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素)，37℃孵育30min。 14) PBS洗3次各5min
15) DAB显色30s，自来水充分冲洗。 16) 苏木素复染2-3min，自来水充分冲洗。 17) 盐酸酒精分化2s，自来水充分冲洗。
18) 脱水、透明80%(5min)→95%(5min)→95%(5min)→100%(5min)→
100%(5min)→二甲苯(10min)→二甲苯(10min)。
19) 封片：中性树脂，加盖玻片(组织部位切勿残留小气泡)，自然晾干。
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4 实验结果
4.1 心肌细胞免疫组化结果
此结果分为两种，空白对照组和样品实验组，空白组心肌细胞在免疫组化实验中除了一抗不加之外，其余的实验步骤均与样品组相同，最后再用苏木素进行复染。样品实验组按照正常的免疫组化实验步骤进行，最后用苏木素进行复染。然后分别拍照。结果如下：
图1 大鼠心肌细胞免疫组化空白组照片大鼠心肌细胞免疫组化样品组照片
4.2 肝脏细胞免疫组化结果
此结果分为两种，空白对照组和样品实验组，空白组肝脏细胞在免疫组化实验中除了一抗不加之外，其余的实验步骤均与样品组相同，最后再用苏木素进行复染。样品实验组按照正常的免疫组化实验步骤进行，最后用苏木素进行复染。然后分别拍照。结果如下：
图2 大鼠肝脏细胞免疫组化空白组照片大鼠肝脏细胞免疫组化样品组照片
图中紫色的小颗粒为苏木素着色的细胞核，细胞的边界呈现的颜色为DAB染色的效果。棕红色的程度越深表明细胞表面的生长激素受体的含量越高。
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5 结论与分析
这四张图中，紫色的小颗粒代表细胞核，此为苏木素复染的颜色。借助苏木素的复染可以清楚的辨别细胞的数量、形态和结构，并且能够凸显细胞的边界。棕红色是DAB染色的效果，正常情况下细胞膜上如果有生长激素受体则会被染成棕红色，细胞质中出现的淡淡的棕红色是由于泛染造成的，并且不同种类的细胞泛染的程度不同。从实验结果来看，心肌细胞的细胞膜表面DAB着色很浅，与心肌细胞空白组相比较没有明显的变化，而肝细胞表面DAB着色很深，而且与肝脏细胞空白组相比变化较大，棕红色较深。综合上述4张图可以表明肝脏细胞表面的生长激素受体的含量要比心肌细胞表面的生长激素受体含量高。这也在一定程度上解释了为什么肝脏细胞的复制活性要强于心肌细胞的复制活性。