（2）酶污染检验：
加100mg果糖和50mgG-1-P到50ml容量瓶中，用安息香酸稀释到50ml，充分混匀，这是碳水化合物溶液。在一个锥形瓶上标明“碳水化合物-葡萄糖”，加1ml碳水化合物溶液和1ml200mg/dl(11.10mmol/L)葡萄糖标准，混合后加40ml试剂水，再混匀，在标有“空白”和“试验”的2个试管中各加入5ml酶试剂，空白管加1.0ml安息香酸稀释液，试验管加1.0ml碳水化合物-葡萄糖溶液，充分混匀各管，不要剧烈震荡，立即转移到经过光径标准的分光光度计的反应杯中，在340nm波长以试剂水为空白测定并记录各管吸光度。以碳水化合物溶液加入酶试剂的杯为零点。如果（a）试验管在6和30分钟时吸光度的差值≤0.010A(b)空白管在6和30分钟时吸光度的差值≤0.005A(c)30分钟吸光度的差值≤0.08A(d)30分钟时试验吸光度的茶汁再用相同方法或规定试验程序检测是100mg/dl葡萄糖标准吸光度-0标准吸光度的差值的4%以内时，酶试剂证明是有效的，如果一台分光光度计检测和记录一种溶液一试剂水的性能是可以接受的，首先进行试验杯的测定，紧接着测定“空白杯”，假如一台分光光度计检测和记录三种溶液一试剂水的性能是可接受的，实验（1）和（2）可以同时进行，假如有多个反应杯，监视和测定同时进行，在进行大量试验前先确定吸光度在0.100±0.01A时，平均被校正地读数不超过这批平均吸光度的0.001。 注意：作为已获得的HK和6-磷酸葡萄糖脱氢酶的一个指南，配制酶试剂的酶质量应符合下列污染特征要求。 污染酶 HK界值 6-磷酸葡萄糖脱氢酶界值2 ≤0.01% ≤0.01% ≤0.001% ≤0.001% 磷酸葡萄糖异构酶 6-磷酸葡萄糖脱氢酶 谷胱甘肽还原酶 磷酸葡萄糖变位酶
1.占HK活性的百分比
≤0.003% ≤0.001% ≤0.005% 2.占6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的百分比
e 血清或血浆除蛋白滤液的配制（Somogyi滤液）
（1）在清洁尖底管中倒入每一种标准液足量，重新放入冰箱冷藏，将样本和标准液放在25℃±1℃水浴箱30分钟，标记带合适玻璃塞的50ml锥形瓶或用18×150nm尖底管。， 样本类型 准备 0浓度标准 其它工作标准 2个生物控制样品 样本 在每批开始和结束时单独分析安息香酸稀释液 50，100，200，300和400mg/dl（2.78，5.55，11.10，16.65和22.20mmol/L）标准，每批开始和结束时单独分析。 适当的浓度和分析史 用试剂水稀释>400mg/dl（22.20mmol/L）的血清和血浆样本 （2）用同一支加样器转移10ml 0.11N的Ba(OH)2溶液到小瓶或试管中。 （3） 从标记的瓶或管中用微量加样器吸取1000ul液面下的第一层样品，轻轻
吹出，用溶液完全冲洗加样器2次，旋转锥形瓶5-10秒，或旋转管5秒，充分混匀。 （4） 在瓶或管中立即加入10ml ZnSo4溶液，盖紧，剧烈振荡，放一侧进行下
一样本操作。 半自动操作：分配样本和Ba(OH)2按以前精密度特性要求可使用稀释配液仪，对于ZnSo4溶液亦可使用高精密度和可信性的固定量程分配器。假如这些半自动步骤有稳定精密度，上面所有量可减至一半，用500ml样品，5ml Ba(OH)2和5ml ZnSo4，使用稳定的防腐剂可预防交叉污染，在加样后用无组织的布仔细擦向下部分的尖。
（5） 用力旋转混合每一个瓶或管，混匀后立即转移到已标记尖底离心管中，一
个18×150mm管即可，也可以使用小一些的可接受一份混合溶液的管，在1000转/分离心10分钟，用一个顶部尽可能长的移液器，将加样器插入溶液前先调至B档，小心吸取每一清洁、标记管的上清液，每个样品用单独清洁的移液器，假如移液器被污染，移出接受管；假如离心分离用的是小管，在一个接受管中收集上清并混合，盖上试管，放25℃±1℃水浴箱，测定每份上清液酶反应。 f 酶反应的测定和执行
（1）标记一系列清洁，带螺旋帽的15×125mm的试管，供每份除蛋白上清液稀释。
（2）每个管用单独移液器或用低于0.2%（1CV）重复分配精度的试剂分配器加5ml酶试剂，将该管放25℃±1℃水浴箱。
（3）在适当的管中用微量移液器移取上清液液面下1000ul酶试剂，轻轻吹出，在液层下完全冲洗加样器2次，吹出残余液体，盖好盖，轻轻颠倒混匀5次，重新放回25℃水浴箱10分钟。
半自动选择：上述使用的符合精密度要求的样本稀释仪加5.0ml酶试剂，1000μl 样本，按E4同样方法预防交叉污染。
（6） 温育10分钟后，缓慢颠倒混匀，所有样本在30分钟内加酶试剂，进行比
色。时间不是很关键因素，但是比色有一系列严格规定，每个样本在样品加入到转移至分光光度计反应杯的大致相同的时间间隔读数，使用一个反应杯或流动比色杯测定，为了测定准确预先用约1ml溶液进行预冲洗。 （7） 波长设定在340nm，用试剂水调零，读取起始系列标准的吸光度，比色杯
彻底冲洗后用试剂水再次调零，读取样本和质控的吸光度，用试剂水再次调零，读取最后系列标准的吸光度。在测定时若吸光度读数漂移超过0.001A，必须增加调零次数，并用试剂水重新调仪器零点。 g 资料评估和计算结果
下面的指南是根据使用标准液和样本葡萄糖浓度评估程序观察提供的证实反应而设计的。
（1） 比色后，记录6个标准液浓度的双份（起始和最后）吸光度：0mg/dl，50
mg/dl ，100mg/dl ，200mg/dl，300 mg/dl和400 mg/dl，用最小二乘法获得标准曲线斜率（b）和截距（a）。每个单独吸光度作为非独立变异因素给出，它的浓度作为独立因素使用，12个吸光度值和12个浓度用于6组数据分析。 （2） 设定“倍增系数（F）”=相关性“b”；校正因数“c”=“a”÷“b”。见下
面例子，b=0.0027756；a=0.0461；F=360.3(mg/dl， 每个吸光度单位)，C=16.6 mg/dl。 （3） 12个标准液的每一个评估浓度的计算通过每一个标准液的吸光度读数
×F-C。见下面例子：开始S50标准的吸光度读数为0.1845，葡萄糖值=（360.3×0.1845）-16.6=49.9 mg/dl。 （4） 比较12个标准的每一个评估浓度与它的理论浓度，在0-200 mg/dl之间
的8个标准的每一个评估浓度，必须在理论浓度±2.0 mg/dl以内，大于200 mg/dl的4个标准的每一个评估浓度必须在理论浓度±2.5 mg/dl，12个标准读数中最多只能有2个可以弃去。假如除去任何读数后留下读数随着F和C的重新计算满足上面说明，使用这些因数可获得修订的评估浓度。 （5） 首先，为了获得有效评估浓度，可以通过删去2个标准界值（上、下界）
尝试满足说明，在此之前也可只除去一个读数，反常的读数可以通过被评估值与理论值的明显差异来识别。下面的例子中开始的S400（计算浓度=394.1 mg/dl）被除去时，剩余的11个读数符合说明，包括最后的S400的读数（重新计算浓度=400.3 mg/dl）。 （6） 如果12个标准中超过2个是不可接受的，本批试验应弃去。
（7） 计算未知样本的浓度通过使用10个或更多的有效标准读数获得的因数进
行。 （8） 为获得有效的系列标准液，假如二个S400读数都被弃去，计算浓度超过330
mg/dl的样品必须用试剂水进行1：2稀释（相等量体积），并重新分析。结果通过稀释倍数校正。 （9） 为了获得有效的系列标准，假如二个S0读数被弃去，计算浓度在45 mg/dl
以下的样本必须另外的分析批中重新测定。 例子 葡萄糖标准浓度获得吸光度 计算浓度用最小计算浓度 （mg/dl） 二乘法 最初值 最后值 无最初 400标最初的 最后准 Abs Abs 的 最初的 最后的 0 50 100 200 300 400 0.0449 0.0445 0.1845 0.1834 0.3249 0.3236 0.6036 0.6016 0.8881 0.8791 1.1401 1.1641
394.1 402.7 -0.4 0.5 0.2 0.1 49.9 49.5 50.1 49.8 100.5 100.0 100.3 99.9 200.8 200.1 200.0 199.2 303.3 300.1 301.6 298.4 400.3