3.限制性核酸内切酶：能够切割DNA多聚核苷酸链中磷酸二酯键的酶称为核酸酶，其中有选择地切割DNA分子特异序列的核酸酶，称为限制性核酸内切酶，简称限制性内切酶。 4.基因组DNA文库：采用限制性内切酶将基因组DNA切成片段，每一DNA片段都与一个载体分子拼接成重组DNA。将所有的重组DNA分子都引入宿主细胞并进行扩增，得到分子克隆的混合体，这样一个混合体称为基因文库 5.cDNA文库：以mRNA为模板，经反转录酶催化合成cDNA，将cDNA的混合体与载体进行连接，使每一个cDNA分子都与一个载体分子拼接成重组DNA。将所有的重组DNA分子都引入宿主细胞并进行扩增，得到分子克隆的混合体，这样一个混合体就称为cDNA文库
6.PCR：PCR又称基因体外扩增特定序列方法。是在反应体系中加入模板DNA、dNTP、特定设计的引物及耐热的DNA聚合酶，经多次变性、退火、延伸循环反应，使目的DNA呈指数形式合成的过程
7.载体：是携带外源基因，实现外源基因的扩增或表达所采用的DNA分子。常用克隆载体有质粒DNA、噬菌体DNA、粘粒DNA、病毒DNA等 8.转化：指将质粒或其它外源DNA导入处于感受态的宿主细胞，并使其获得新的表型的过程。转化常用的宿主细胞是大肠杆菌
9.感染：转染：以噬菌体进入宿主菌、病毒进入宿主细胞中繁殖的过程称为感染。用人工改造的噬菌体或病毒作为载体以其DNA与目的基因重组后，在体外用噬菌体或病毒的外壳，将重组DNA包装成有活力的噬菌体或病毒，就能以感染的方式进入宿主细菌或细胞。
10.核酸分子杂交：核酸分子杂交是依据两条核酸单链之间碱基互补、变性和复性的原理，用已知碱基序列的单链核苷酸片段作为探针，检测待测样品中是否存在与其互补的同源核苷酸序列的方法。 11.Southern印迹杂交 12.Northern印迹杂交
13.斑点印迹：指DNA与DNA的杂交，将经过限制性内切酶消化和变性后电泳分离的待测DNA片段转印并结合到一定的固相支持物上，然后与标记的DNA探针杂交。
14.原位杂交：指将待测RNA样品经电泳分离后转移到固相支持物上，然后与标记的核酸探针进行杂交，以检测RNA的方法。其基本原理和基本方法与Southern印迹杂交基本相同。 15.DNA芯片：DNA芯片技术是指将大量的已知寡核苷酸或DNA探针按特定的排列方式固化在固相支持物表面，按碱基互补配对的原则，与标记的特异的单链DNA或RNA（待测样品）分子杂交形成双链，通过对杂交信号的检测分析，即可得出样品分子的数量和序列信息。
16.基因诊断：是以DNA和RNA为诊断材料，DNA反映基因的存在状态，RNA反映基因的表达状态，通过检测基因存在、缺陷或表达异常，对人体状态和疾病作出诊断的方法和过程。
17.基因治疗: 基因治疗是指以正常基因矫正替代缺陷基因，或从基因水平调控细胞中缺陷基因的表达的一种治疗疾病的方法。
（ ）8. 生物芯片可分为DNA芯片、蛋白质芯片和其它芯片。
（ ）9. RT-PCR可用于丙型肝炎的临床检测。
（ ）10.粘粒是将λ噬菌体的cos区与质粒组合的装配型载体。
【参考答案】
1.是 2. 是 3. 是 4. 是 5.非 6.是 7. 是 8. 是 9. 是 10. 是
四、【简答题】
1.简述基因工程的主要过程。 2.什么是载体？可分几类？ 3.pUC质粒有何特点？
4.采用哪些方法可获取目的基因？
5.目的基因与载体的连接有哪几种方法？ 6.重组体主要有哪些筛选和鉴定方法？
7.分子杂交的基本原理是什么？有哪些基本方法？ 8.常用的探针标记物有哪些？ 【简答参考答案】
1.（1）目的基因的获取
（2）克隆载体的选择与构建 （3）目的基因与载体的连接
（4）重组DNA分子导入受体细胞 （5）重组体的筛选鉴定 （6）克隆基因的表达
2.载体是为携带外源基因，实现外源基因的扩增或表达所采用的DNA分子。可分为质粒 、 噬菌体 、 粘粒 、 病毒等。 3. （1）pBR 322的氨苄青霉素抗性基因和复制起始位点。 （2）大肠杆菌乳糖操纵子的调节基因、启动子、操纵基因及lacZˊ基因片段。
4. 基因组DNA文库 制备cDNA文库 PCR 化学合成 5.主要有以下四种 （1）粘性末端连接 （2）同聚物加尾连接 （3）平末端连接 （4）人工接头连接 6.（1）遗传学方法 （2）分子杂交方法 （3）免疫学方法
7. 分子杂交的基本原理：核酸分子杂交技术是基于具有互补序列的两条单链核酸分子在一定条件下碱基互补配对结合，形成双链的原理。在这一过程中，核酸分子经历了变性和复性的变化，杂交的双方分别称为探针与待测核酸，杂交后形成的异源双链分子称为杂交分子。
基本方法：Southern印迹杂交 Northern印迹杂交 斑点印迹 原位杂交
8.常用的标记物有放射性核素：32P、35S、3H、125I、131I等和非放射性核素有地高辛、生物素、荧光素和酶等非放射性核素。
五、【简答或论述题】
三、【是非题】
1.何为PCR？试述其基本原理。
PCR又称基因体外扩增特定序列方法。是在反应体系中加（ ）1.当代最新的生物技术包括基因工程、蛋白质工程、1．
入模板DNA、dNTP、特定设计的引物及耐热的DNA聚合酶，酶工程和细胞工程。
经多次变性、退火、延伸循环反应，使目的DNA呈指数形式（ ）2.碱性磷酸酶能防止载体的自身连接。
合成的过程。 （ ）3.限制性内切酶一般有特异的识别和切割位点。
（ ）4.重组DNA技术又称为分子克隆技术或基因工程技术。 基本原理：PCR扩增首先需要一对引物，根据待扩增区域两
端已知序列合成两个与模板DNA互补的寡聚核苷酸引物，这（ ）5.原位杂交是在组织和细胞外进行的。
一单链引物的序列将决定扩增片段特异性和长度。PCR反应（ ）6.探针的长度一般是十几到几千个碱基不等。
体系有基因组DNA、一对引物、dNTP、Taq DNA聚合酶、（ ）7. PCR又称为聚合酶链反应。
21
酶反应缓冲体系及必需的离子强度等组成。反应在加热变性、按照芯片上固定的核酸大小可以分为三种类型、两种模式：使基因组双链DNA变性为单链后，通过降低温度使特异引物寡核苷酸芯片、cDNA芯片和基因组芯片。 与互补的DNA序列特异结合（退火或复性）后在耐热7、对于人类来说，SNP的意义在于哪些？ TaqDNA聚合酶作用下，以基因组单链DNA为模板，从引物1、致病SNP 端开始按5‘→3‘方向合成DNA（延伸）。这样经过变性→复2、疾病易感性SNP 性→延伸三步为一个循环，每一循环的产物作为下一个循环3、具有诊断价值的SNP 的模板，如此循环30次，介于两个引物之间新生DNA片段4、疾病的SNP谱 理论上达到230拷贝，约109个分子。 5、人表型相关SNP 2.DNA芯片技术的基本原理及应用。 6、药物作用与不良反应的SNP 2.基本原理：将大量已知道寡核苷酸或DNA探针按特定的排7、药物剂量SNP
列方式固化在固相支持物表面，按碱基互补配对的原则，与8、请解释什么是基因组DNA文库(genomic DNA library)？ 标记的特异的单链DNA或RNA分子杂交形成双链，通过对利用限制性核酸内切酶将组织或细胞染色体DNA切割后，与杂交信号的检测分析，即可得出样品分子的数量和序列信息。适当载体连接后转入受体菌，这些受体菌包含了所有基因组DNA芯片上固定的探针可以是cDNA、寡核苷酸或来自基因DNA信息，总称基因组DNA文库 组的基因片段，且这些探针固化于芯片上形成基因探针阵列，cDNA文库(cDNA library)：以mRNA为模板，利用反转录酶因此，DNA芯片又被称为基因芯片、DNA阵列、cDNA芯合成与mRNA互补的DNA，再复制成双链cDNA片段，与片、寡核苷酸阵列等。 适当载体连接后转入受体菌，这些受体菌包含了所有cDNA应用：（1）DNA序列测定 信息，总称cDNA文库 。常用于筛选编码蛋白质的结构基因。 （2）突变及多态性分析 9、请简述构建基因文库的基本程序？ （3）基因表达分析 1)提取研究对象基因组DNA，制备合适大小的DNA片段，（4）基因组研究 或提取组织或器官的mRNA并反转录成cDNA； （5）基因诊断 2) DNA片段或cDNA片段与经特殊处理的载体连接形成重（6）药物研究与开发 组DNA； 3、简述分子杂交的一般程序？ 3)重组DNA转化宿主细胞或体外包装后侵染受体菌； 1) DNA和RNA的杂交 4)阳性重组菌落或噬菌斑的选择。 制备DNA或RNA样品→与固定基质结合→80℃真空固定→10、重点简答题：一个理想的基因组DNA文库应具备下列条预杂交→加入标记探针杂交→洗涤→放射自显影或显色反件？ 应。 重组克隆的总数不宜过大，以减轻筛选工作的压力 2）蛋白质的免疫分析 载体的装载量最好大于基因的长度，避免基因被分隔克隆 制备蛋白质样品→与固定基质结合→常温空气中固定→封闭克隆与克隆之间必须存在足够长度的重叠区域，以利克隆排剂封闭→ 一抗反应→洗涤→二抗-酶偶联物反应→洗涤→显序 色反应（EIA） 克隆片段易于从载体分子上完整卸载 或 → 一抗放射标记物→洗涤→放射自显影（RIA） 重组克隆能稳定保存、扩增、筛选等后续操作 4、简述Southern blotting基本方法？ 11、自身引导合成第二链的原理怎样？ 将DNA标本用限制性内切酶消化后，经琼脂糖凝胶电泳分离 首先用氢氧化钠消化杂合双链中的mRNA 链，解离的第各酶解片段； 一链 cDNA 的 3‘-末端就会形成一个发夹环（发夹环的产经碱变性，Tris缓冲液中和，高盐下通过毛吸作用将DNA从生是第一链 cDNA 合成时的特性，原因至今未知，据推测可凝胶中转印至硝酸纤维素滤膜上，烘干固定，凝胶中DNA片能是由帽子的特殊结构相关）， 段的相对位置在DNA片段转移到滤膜的过程中继续保持着。 这个发夹结构可以作为引物并引导 DNA 聚合酶复制出第二附着在滤膜上的DNA与32P标记的探针杂交，利用放射自链，此时形成的双链之间是连接在一起的，再利用 S1 核酸显影术确定探针互补的每条DNA带的位置，确定在众多酶解酶将连接处切开（仅该位点处为单链结构，切断形成平端结产物中含某一特定序列的DNA片段的位置和大小。 构，可以进行后续连接反应） 。 5、分子杂交检测常用的探针类型有？ 12、重点论述题：在PCR时，简述前三个周期中的重要变化？ 分子杂交检测其互补序列的标记DNA或RNA序列，能在许第一周期中，合成的每一条新生链都超出了另一个引物的位多DNA或RNA序列的复杂混合物中识别所需克隆的分子。 置；在第二个周期中， DNA探针(DNA probe) 通过同样的变性、复性、延伸步骤，进行新一轮的扩增，以RNA探针(RNA probe) 第一周期中合成的DNA 简并探针(degenerate probe) 为模板合成的DNA位于两引物位置之间，这就是所需扩增的6、生物芯片的一般类型包括那些，举例说明？或填空？ 特异DNA片段；在第三个
1. 按照芯片基质上固定的生物材料的不同，可以将生物周期中，经过同样的变性、复性、延伸步骤进行扩增， 芯片划分为DNA或基因芯片、蛋白质芯片、RNA芯片、细在第三个周期中，经过同样的变性、复性、延伸步骤进行扩胞芯片、组织芯片、芯片实验室(Lab on chip)。 增，以第二轮中的新生链
如果芯片上固定的是肽或蛋白，则称为肽芯片或蛋白芯片； 为模板，就形成特异DNA双链，以后每增加一轮，它扩增一如果芯片上固定的分子是寡核苷酸探针或DNA，就是DNA倍，是指数扩增
芯片。根据生物化学反应过程，又可以将生物芯片进行另外13、较重点论述题：荧光定量PCR的原理采用的是什么？ 一种分类：因为通常的生物化学反应过程包括三步：即样品主要原理：是在待扩增区域（模板DNA）结合上DNA探针，的制备、生化反应、结果检测和分析。 PCR过程中，具有5’→3’外切酶活性的Taq酶延伸引物链 所以我们可以根据这三个不同的步骤，把生物芯片分为到DNA探针时，将DNA探针逐个降解，释放出荧光报告基不同的类型即用于样品制备的生物芯片，生化反应生物芯片团，可以发出荧光，而且PCR体系中发出荧光的强度与PCR及各种检测用生物芯片等。 产物量之间存在正比关系，可通过测定荧光强度而对PCR产按照芯片上基因探针的密度又可将基因芯片分为高、中、低物定量 密度三种。 RT-PCR是反转录酶PCR，其技术原理是将一段待测的RNA 22
序列经反转录酶的作用转录成cDNA，再利用PCR技术将基1、利用锁定引物(lock docking primer)合成第一链cDNA，即因片段以几何级数倍增的方式增加到数十万倍，所形成的在oligo(dT)引物的3’端引入两个简并的核苷酸[5’PCR基因产物经一种叫Ethidium bromide的化学物质作用，-Oligo(dT)16-30MN-3’，M=A/G/C；N=A/G/C/T]，使引物定利用其会与DNA嵌合，经紫外灯照射时会发出肉眼可见的萤位在poly(A)尾的起始点，从而消除了在合成第一条cDNA链光，即在电泳胶片上会呈现具有特定分子量的PCR基因片段时oligo(dT)与poly(A)尾的任何部位的结合所带来的影响； 的产物。 2、在5’端加尾时，采用poly(C)，而不是poly(A) 14、较重点论述题：论述蓝白斑筛选原理？ 3、采用RNase H- MMLV（莫洛尼氏鼠白血病毒反转录酶）这类载体通常含有大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因lacZ的 N端 或选择嗜热DNA聚合酶可能在高温（60度-70度）有效地逆146 个氨基 酸残基编码基因，其编码产物为 β-半乳糖苷酶转录mRNA，从而消除了5’端由于高CC含量导致的mRNA 的 α 链；而所用的宿主菌通常用lac缺失突变型的大肠杆二级结构对逆转录的影响
菌，该菌可表达该酶 的 ω 片段(酶的 C 端区)。当空载体4、采用热启动PCR (hot start PCR)技术和降落PCR(touch 或者自身环化的载体转入宿主细胞 时，β-半乳糖 苷酶的 down PCR)提高PCR反应的特异性 α、ω 两个片段能同时表达，发生互补，形成完整且具有活 性的 β-半乳糖苷酶，后者可使人工加入的底物 X-gal 转变
第五、六章 分子生物学研究方法练习题2
为蓝色；如果外源基因插入到 载体的 lacZ α 片断的基因内，由于插入失活，形成的重组子即使转入 lac- 大肠杆菌也
一、【名词解释】
不能形成完整的 β-半乳糖苷酶，表现为重组菌在 含 X-gal
的培养基上生长时成白色菌落。这一现象称α-互补，可用于1．功能基因组学 2．蛋白质组学 3．功能性克重组体筛选，又称 蓝、白斑实验。 隆 4．定位克隆 5．转基因技术 15、FRET的理论基础？ 【参考答案】 Forster提出了共振转移理论
1．功能基因组学：指探讨单一类细胞（组织）在其生命的一
两个分子的振动频率相同，可发生能量转移（就好像一个振
定时刻、一定条件所表达的基因的种类和数量；比较不同细
动的音叉可引起附近另一具有相同频率的另一音叉振动一
胞之间、或同一细胞在不同条件下基因表达的差异。
样），因此称共振能量转移。
2．蛋白质组学：是指细胞或组织中基因组所表达的全部蛋白
16、超难度论述题：当一个基因片段的核苷酸序列测定以后，
质，尤其是指对于不同生命时期，或正常、或疾病、或给药
我们一般应认真做好哪些数据分析？
前后的蛋白质变化所作的分析。
1) 将所有的核苷酸序列按测序策略图排列基因序列；
3．功能性克隆：指从对一种基因的功能的了解出发克隆该致
2) 利用DNA序列分析软件制作限制酶图，并与直接作图法
病基因的策略。例如血友病的第Ⅷ因子基因是以此策略克隆
所获图谱进行比较；
成功的。
3) 利用DNA序列分析软件进行基因启动子，核糖体结合序
4．定位克隆：有时特指图位克隆，指从染色体定位、遗传作
列以及基因表达调控序列的分析；
图或者物理作图出发逐步缩小范围，在特定的标记附近克隆
4) 利用DNA序列分析软件或直接将序列与Genbank中的数
该基因的策略。例如DMD致病基因是以此策略克隆成功的。
据进行同源性比较；
5．转基因技术：指将目的基因整合入受体细胞比如受精卵细
5) 利用DNA序列分析软件进行ORF的分析，并推断出相应
胞或胚胎干细胞或者植物组织，然后使之发育成携带外源基
的蛋白质序列；
因的个体。该个体能把目的基因继续传给子代，该技术称转
6) 利用DNA序列分析软件进行蛋白质中信号肽，糖基化位
基因技术。目的基因的受体动物就是转基因动物。
点，同源性分析等。
6．核转移技术即动物整体克隆技术。主要是指是将动物的体
17、酵母双杂交系统的原理
细胞核全部导入另一个体的去除了胞核的受精卵内，使之发
将编码某一蛋白X的DNA序列与DNA结合域BD的编码序
育成个体的技术。
列融合形成一个杂交体，同时将编码另一蛋白Y的DNA序列与DNA激活域AD的编码序列融合形成另一个杂交体，然
二、【填空题】
后将两个杂交体转染酵母细胞，这个酵母细胞含有一个报告
基因，报告基因上游存在转录因子的结合位点的，若x和Y1．Southern blotting、Northern blotting和Western blotting是没有相互作用，则单独不能激活报告基因的转录；若X和Y分别用于研究____ 、____ 和____ 转移的有关技术。
可相互作用，则使BD和AD靠近形成一个有效的转录激活2．用PCR扩增DNA片段，在反应中除了用该DNA片段作子，激活报告基因的转录。因此，可通过检测报告基因的转为模板外，尚需加入____ 、____ 、____ 和____。 录与否来研究蛋白质x和Y的相互作用 。 3．PCR的基本反应步骤包括____ 、____ 和____ 三步。 18、什么是基因敲除技术（gene knock-out/down ）？ 4．Sanger法DNA测序的基本步骤包括____ 、____ 、____ 又称基因打靶（gene targeting）。这种技术是通过基因工程的和____ 四步 方法将一个结构已知但功能未知的基因去除，或用其他序列
5．人类基因组计划的主要研究内容包括____ 、____ 、____ 、
相近的基因取代（又称基因敲入），然后从整体观察实验动物，
____和____。
从而推测相应基因的功能。这种人为地把实验动物某一种有
6．后基因组时代的主要研究内容是____ 和____。
功能的基因完全缺失的技术称为基因敲除技术。
7．目前克隆致病相关基因的主要策略有____ 、____ 和____。
19、什么是定点突变？
【填空题参考答案】
定点突变（site－directed mutagenesis）是重组DNA进化的基
1．DNA RNA 蛋白质 2．引物 Taq DNA聚合
础，该方法通过改变基因特定位点核苷酸序列来改变所编码
酶 dNTP 含Mg2+的缓冲液 3.变性 退火 延伸
的氨基酸序列，常用于研究某个（些）氨基酸残疾对蛋白质
4．模板-引物杂交 引物延长与合成阻断 电泳 放射自
的结构、催化活性以及结合配体能力的影响，也可用于改造
DNA调控元件特征序列、维修表达载体、引入新的酶切位点显影直（读图） 5．遗传图分析 物理图分析 转录图分
析 序列图分析 资料的储存和利用 6．功能基因组等。
学 蛋白质组学 .功能性克隆 定位克隆 候选基因克20、超难度论述题：如何对对传统RACE技术的改进？
隆 7．功能性克隆 定位克隆 主要是引物设计及RT-PCR技术的改进
23
D．重组DNA必须能在受体细菌内进行复制与转录，并合成人的胰岛素
1、基因工程技术引起的生物变异属于 11.限制性核酸内切酶切割DNA后产生
A. 5′磷酸基和3′羟基基团的末端 A．染色体变异 B．基因突变
C．基因重组 D． 不可遗传的变异 B. 5′磷酸基和3′磷酸基团的末端
2、DNA重组技术的操作步骤：①使目的基因与运载体相结C. 5′羟基和3′羟基基团的末端 合，②将目的基因导入受体细胞，③检测目的基因的表达是D. 3′磷酸基和5′羟基基团的末端 否符合特定性状要求，④提取目的基因。正确的操作顺序是E. 以上都不是 （ ） 12. 可识别并切割特异DNA序列的酶是 A．③②④① B．②④①③ A. 非限制性核酸外切酶 B. 限制性核酸内切酶
C. 限制性核酸外切酶 D. 非限制性核酸内切酶 C．④①②③ D．③④①②
E. DNA酶 3、基因工程常用的受体细胞有
①大肠杆菌 ②枯草杆菌 ③支原体 ④动植物细胞 13. 有关限制性核酸内切酶，以下哪个描述是错误的？ A．①②③④ B．①②③ A. 识别和切割位点通常是4～8个bp长度
B. 大多数酶的识别序列具有回文结构 C．②③④ D．①②④
C. 在识别位点切割磷酸二酯键 4、下列有关重组DNA技术的正确叙述是
A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体 D. 只能识别和切割原核生物DNA分子 B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列 E. 只能切割含识别序列的双链DNA分子
14. 在重组DNA技术中催化形成重组DNA分子的酶是 C．选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快
D．只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达 A. 解链酶 B. DNA聚合酶 5、下列关于基因工程应用的叙述，正确的是 C. DNA连接酶 D. 内切酶 E. 拓扑酶
15. 对基因工程载体的描述，下列哪个不正确？ A．基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因
A. 可以转入宿主细胞 B. 有限制酶的识别位点 B．基因诊断的基本原理是DNA分子杂交
C．一种基因探针能检测水体中的各种病毒 C. 可与目的基因相连 D. 是环状DNA分子 D．原核生物基因不能用来进行真核生物的遗传改良 E. 有筛选标志
6、中国农业科学院科学家郭三堆运用基因工程技术，将苏云16. 克隆所依赖的DNA载体的最基本性质是 金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达，培育出了A. 卡那霉素抗性 B. 青霉素抗性 抗虫棉。下列叙述不正确的是 C. 自我复制能力 D. 自我表达能力 A．抗虫基因的提取和运输都需要专用的工具和运载体 E. 自我转录能力
B．重组DNA分子中增加一个碱基对，不一定导致毒蛋白的17. 重组DNA技术中常用的质粒DNA是
A. 病毒基因组DNA的一部分 毒性丧失
C．抗虫棉的抗虫基因可能通过花粉传递到近缘作物，从而造B. 细菌染色体外的独立遗传单位 成基因污染 C. 细菌染色体DNA的一部分 D．转基因棉花是否具有抗虫特性是通过检测棉花对抗生素D. 真核细胞染色体外的独立遗传单位 抗性来确定的 E. 真核细胞染色体DNA的一部分
7、基因工程技术可使大肠杆菌合成人的蛋白质。下列叙述不18. 下列哪种物质一般不用作基因工程的载体？
A. 质粒 B. 噬菌体 C. 哺乳动物的病毒 正确的是
D. 逆转录病毒DNA E. 大肠杆菌基因组 A．常用相同的限制性内切酶处理目的基因和质粒
B．DNA连接酶和RNA聚合酶是构建重组质粒必需的工具19. 关于pBR322质粒描述错误的是 酶 A．有一些限制酶的酶切位点 B．含有1个ori. C．可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质C．含有来自大肠杆菌的lacZ基因片段
D．含个氨卞青霉素抗性基因 粒
D．导入大肠杆菌的目的基因不一定能成功表达 E．含四环素抗性基因。 8、基因治疗是指 20. 以mRNA为模板催化cDNA合成需要下列酶 A．对有基因缺陷的细胞进行修复，从而使其恢复正常，达A. RNA聚合酶 B. DNA聚合酶
C. Klenow片段 D. 逆转录酶 E. DNA酶 到治疗疾病的目的
B．把健康的外源基因导入到有基因缺陷的细胞中，达到治疗21. 催化聚合酶链反应需要下列酶 疾病的目的 A. RNA聚合酶 B. DNA聚合酶 C．运用人工诱变的方法，使有基因缺陷的细胞发生基因突变C. TaqDNA聚合酶 D. 逆转录酶 E.限制性核酸内切酶 恢复正常 22. 关于PCR的描述下列哪项不正确？
D．运用基因工程技术，把有缺陷的基因切除，达到治疗疾A. 是一种酶促反应 B. 引物决定了扩增的特异性
C. 扩增产物量大 D. 扩增的对象是DNA序列 病的目的
E. 扩增的对象是RNA序列 9、下列关于质粒的叙述，正确的是
A．质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器 23. 在基因工程中，DNA重组体是指
B．质粒是细菌细胞质中能够自主复制的小型环状DNA分子 A. 不同来源的两段DNA单链的复性
B. 目的基因与载体的连接物 C．质粒上有细菌生活所必需的基因
C. 不同来源的DNA分子的连接物 D．细菌质粒的复制过程一定是在宿主细胞外独立进行的
10、利用细菌大量生产人的胰岛素，下列叙述错误的是 D. 原核DNA与真核DNA的连接物 A．用适当的酶对运载体与人的胰岛素基因进行切割与连接 E. 两个不同的结构基因形成的连接物
B．用氯化钙处理受体细菌表面，将重组DNA导入受体细菌 24．经电泳分离后将RNA转移到硝酸纤维素（NC）膜上的C．通常通过检测目的基因产物来检测重组DNA是否已导入技术是 受体细菌 A．Southern blotting B．Northern blotting 24
三、【单项选择题】
C．Western blotting D．dot blotting 为 E．in situ hybridization A．待测DNA5ˊ→3ˊ的碱基序列 25．不经电泳分离直接将样品点在NC膜上的技术是 B．待测DNA3ˊ→5ˊ的碱基序列 A．Southern blotting B．Northern blotting C．待测DNA互补链3ˊ→5ˊ的碱基序列 C．Western blotting D．dot blotting D．待测DNA互补链5ˊ→3ˊ的碱基序列 E．in situ hybridization E．引物5ˊ→3ˊ的碱基序列 26．经电泳分离后将蛋白质转移到NC膜上的技术是 43．PCR实验的特异性主要取决于 A．Southern blotting B．Northern blotting A．DNA聚合酶的种类 B．反应体系中模板DNA的量 C．Western blotting D．dot blotting C．引物序列的结构和长度 D．四种dNTP的浓度 E．in situ hybridization E．循环周期的次数 27．经电泳后将DNA转移至NC膜上的技术是 44．基因剔除（knock out）的方法主要被用来研究 A．Southern blotting B．Northern blotting A．基因的结构 B．基因的功能 C．Western blotting D．Eastern blotting C．基因的表达 D．基因的调控 E．in situ hybridization E．基因的突变 28．PCR的特点不包括 45．反义核酸作用主要是 A．时间短，只需数小时 B．扩增产物量大 A．封闭DNA B．封闭RNA C．只需微量模板 D．用途非常广泛 C．降解DNAD．降解DNA E．封闭核糖体的功能 E．底物必须标记 46．有关Sanger法测序的叙述，不正确的是 29．用于自动化PCR仪的DNA聚合酶必须 A．只需标记一种dNTP A．耐热 B．耐高压 C．耐酸 B．一般应去除DNA聚合酶I 的5ˊ→3ˊ外切酶活性 D．耐碱 E．耐低温 C．与dNTP相比阻断剂应尽可能的多 30．PCR反应过程中，模板DNA变性所需温度一般是 D．反应时间不必太长 A．95℃ B．85℃ C．75℃ D．65℃ E．55℃ E．应采用超薄高压电泳 31．PCR反应过程中，引物粘合所需温度一般是 52．PCR变性温度一般是 A．72℃B．85℃C．75℃D．65℃ E．55℃ A．95℃ B．85℃ C．72℃ D．65℃ E．55℃ 32．PCR反应过程中，引物延伸所需温度一般是 53．PCR退火温度一般是 A．95℃B．82℃C．72℃D．62℃ E．55℃ 54．PCR引物延伸温度一般是 33．PCR反应体系不包括 A．95℃ B．85℃ C．72℃ D．65℃ E．55℃ A．模板DNAB．Taq DNA聚合酶 55．同聚物加尾连接需要 C．特异性引物A、BD．ddNTP A．Taq DNA聚合酶 B．末端核苷酸转移酶
2+
E．含Mg的缓冲液 C．Klenow大片段 D．反转录酶 E．Klenow小片段 34．PCR的循环次数一般为 56．PCR需要 A．5～10次B．10～15次 A．Taq DNA聚合酶 B．末端核苷酸转移酶 C．15～20次D．20～25次E．25～30次 C．Klenow大片段
35．PCR反应体系与双脱氧末端终止法测序体系不同的是缺D．反转录酶 E．Klenow小片段 少 57．Sanger法测序需要 A．模板B．引物 C．DNA聚合酶 A．Taq DNA聚合酶 B．末端核苷酸转移酶 D．ddNTP E．缓冲液 C．Klenow大片段 36．Sanger法测序不需要 D．反转录酶 E．Klenow小片段 A．Klenow小片段 B．引物 58．由mRNA合成cDNA需要 C．dNTP D．标记dNTPE．ddNTP A．Taq DNA聚合酶 B．末端核苷酸转移酶 37．Sanger法测序的基本步骤不包括 C．Klenow大片段 A．标记模板 B．模板-引物杂交 D．反转录酶 E．Klenow小片段
C．引物的延长与合成阻断 D．电泳
E．放射自显影直读图
【单项选择题答案】 38．Sanger法测序的四个反应体系中应分别加入不同的
1.C2.C3.D4.C5.B6.D7.B8.B9.B10.C A．模板 B．引物
通常使用抗药性标记筛选而不是直接用表达产物筛选C．标记dNTP D．DNA聚合酶
11.A12.B13.D14.C15.D16.C17.B18.E19.C20.D21.C22.E23.B24
E．ddNTP
.B25.D26.C27.A28.E29.A30.A31.E32.C33.D34.E35.D36.A37.A
39．人类基因组计划的主要研究内容不包括
38.E39.E注意人类基因组计划的原初技术是要制备四张图
A．遗传图分析 B．物理图分析 40.B41.E42.D43.C C．转录图分析 D．序列图分析 44.B45.B46.C47.B48.A49.C50.D51.E52.A53.E54.C72℃是一般E．蛋白质功能分析 PCR的固定值55.Ｂ56.A57.C58.Ｄ 40．1996年，英国科学家克隆的Dolly羊所采用的技术是 A．转基因技术 B．核转移技术 【多项至少两个选项的选择题】 C．基因剔除技术 D．肽核酸技术 59．PCR反应体系中含有 E．反义核酸技术 A．特异性引物 B．Klenow大片段 C．dNTP 41．Maxam-Gilbert法与Sanger法测序的共同点是均需 D．ddNTP E．35S-α-dATP A．引物 B．Klenow大片段 60．PCR循环的反应步骤包括 C．ddNTP D．化学裂解试剂 A．复性 B．变性 C．退火 D．引物延伸 E．电泳后放射自显影读图 E．引物终止 42．Sanger法测序所得直读图像中，由终点至始点所读序列 25