?
②流动相中溶剂被蒸发，留下溶质； ③激光束照在溶质颗粒上产生散射光； ④散射光信号→电信号。 特点和应用：
? 属通用型检测器。
? 适合于无紫外吸收、无电活性和无荧光发射样品的检测。 ? 优于IR：信噪比高，可梯度洗提
表2-6-1 HPLC中常见检测器的基本特性
§2.7 高效液相色谱分离类型的选择（了解）
2.7.1 色谱分离类型的选择 1、根据相对分子质量选择
? 200以下 → 气相色谱法
? 200 ~ 2000 → 液固吸附、液-液分配和离子交换色谱法。 ? 高于2000 → 凝胶色谱法 2、根据溶解度选择
? 水溶性样品 → 离子交换和液液分配色谱法； ? 微溶于水、易电离样品 → 用离子交换色谱法； ? 油溶性或相对非极性样品 →液-固色谱法。 3、根据化学结构选择
? 异构体的分离 → 液-固色谱法；
? 同系物和具有不同官能团化合物 → 液－液分配色谱； ? 生物大分子或高分子聚合物 → 凝胶色谱法；
? 离子基团和能电离基团组分 → 离子交换色谱。
表2-7-1 液相色谱分离类型选择参考表
§2.8 高效液相色谱应用实例（了解）
2.8.1 高效液相色谱应用领域与分析对象举例
§2.9 液相制备色谱（了解）
? 有机复杂样品的组成、结构分析时常需要纯化?制备色谱成为最有力的手段 ? 制备色谱：以色谱技术来分离、制备较大量的纯组分 2.9.1 液相制备色谱的特点与优势 1、与分析色谱的区别： ? 柱容量大
? 有组分收集器
2、用HPLC制备的优势： ? 分离条件温和 ? 一般不破坏试样 ? 有利于试样收集
2.9.2 液相色谱制备的几个主要问题
1、色谱柱容量——制备柱比与分析型柱柱容量要大。 ? 分析型柱：内径：4.6 mm
? 制备柱： 内径：10mm，20 mm ，50 mm… ? 一次可以制备0.1~1mg纯品 ? 制备色谱主要限制之一：进样量???柱效?0?分离度?0； 2、液相制备色谱方法：在分析型HPLC试验，优化，试出最大允许量。 3、液相制备色谱仪
? 检测器后增加自动馏分收集器；
? 可将试样组分按顺序收集在玻璃管内。
§2.10 毛细管电泳（CE）（了解）
2.10.1 毛细管电泳的基本原理与仪器装置 1、基本原理
? 电泳：在电场作用下，带电粒子在介质中定向移动。
? 毛细管电泳：利用被分析离子在电场作用下移动速率不同而达到分离目的。 ? CE分析对象：在毛细管缓冲溶液中能离解为离子的物质。 ? 它有多种分离模式
? 可以分离离子和中性分子
? 可以采用HPLC中的各种检测方法 （1）经典电泳的局限性 ? 电场强度低：
? 离子迁移速度慢，分离时间长，组分扩散严重，分离效果差。 ? 焦耳热使组分扩散严重（电泳电流大） 。 （2）高效毛细管电泳在技术上的两项重要改进： ? 采用了极细内径的毛细管（25~75?m），减小了焦耳热导致峰扩展（毛细管散热效率高） ? 采用了数千伏的高压（20~30kV ），加高电场后，离子迁移速度加快，减小了组分扩散。 ? 电渗流现象：在电场作用下，管中溶液整体向负极移动，形成电渗流
分离过程：
? 正离子：电泳、电渗同向→最先出峰 ? 中性粒子：迁移速度=电渗速度，次之 ? 负离子：电泳、电渗反向 →最后出峰
2、仪器装置
? 毛细管柱中充入缓冲溶液，柱两端置于两个缓冲池中。 ? 在缓冲池两个铂电极加高压。
? 试样从一端进入，在另一端检测器。
? 检测器同HPLC，常用紫外光度检测器（DAD）
（1）CE柱效：
n?(?ep??eo)V
（HPLC：H?1,与此不同） D2D式中——μep:电泳淌度；μeo：电渗淌度；V：外加电压；D：扩散系数。
『淌度：离子在介质中单位时间和单位场强下移动的距离。』 ? CE比HPLC分辨能力更高： ①CE为平流，峰展宽小；HPLC为层流，峰展宽大； ②CE没有死体积存在。 （2）CE与HPLC分离的差异 ①CE：柱效高（传质阻力为零，分子扩散很小）
HPLC：柱效较低（存在涡流扩散、传质阻力和分子扩散） ②CE：依据迁移速率差异分离； HPLC：依据分配系数差 ③CE适合大分子分离
1CE：H?D?（分子量越大，柱效越高）
M1HPLC：H??M
D（3）CE：分离效率高、检测灵敏度高，样品用量极少。 在生物医药分析中显示出突出的优越性。
2.10.2 毛细管电泳的分离模式与应用
1、毛细管区带电泳（CZE） ——基于组分间荷质比的差异分离 — 最为常见 2、毛细管凝胶电泳（CGE）
? 毛细管柱内交联生成凝胶。
? 具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离 ? 可分离测定蛋白质、DNA等。
3、毛细管胶束电动色谱（MEKC）——解决中性分子的分离 ? 在缓冲液中加入离子型表面活性剂， ? 形成一疏水内核、外部带负电的胶束， ? 样品受电场和“假固定相”之间分配， ? 疏水性组分留在胶束相时间长，保留时间长
4、毛细管等电聚焦（CIEF）——根据样品等电点不同实现分离的技术。 5、毛细管等速电泳 （CITP）
? 使用两种电解质（前导电解质、尾随电解质） ? 样品在两个电解质界面中间，逐步分离。 6、毛细管电渗色谱（CEC）
? 在毛细管中填充液相色谱固定相载体。 ? 与HPLC区别是以渗透流为驱动力。