5、组织培养细胞再分化包括四个水平：细胞水平的再分化、组织水平的再分化、器官水平的再分化（器官发生）和植株水平的分化
二、名词解释：
1、愈伤组织培养(callus culture):是指将母体植株上的外植体，接种到无菌的培养基上，进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术。 2、继代培养 (subculture)：愈伤组织在培养基上生长一段时间以后，由于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，必须转移到新鲜培养基上培养。这个过程叫做继代培养 3、体细胞胚（somatic embryo）又称胚状体（embryoid）：指在组织培养中，由一个非合子细胞(体细胞)，经过胚胎发生和胚胎发育过程（经过原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚5个时期），形成的具有双极性的胚状结构。
4、体细胞胚胎发生：植物组织培养细胞产生胚状体的过程，称为体细胞胚胎发生。 5、细胞全能性（cell totipotency）：每一个植物细胞具有该植物的全部遗传信息，在适当条件下可表达出该细胞的所有遗传信息，分化出植物有机体所有不同类型细胞，形成不同类型的器官甚至胚状体，直至形成完整再生植株
6、形态建成：外植体细胞在适宜的培养条件下发生脱分化、再分化，产生芽和根，或者形成胚状体，发育成苗或完整植株。
三、问答题
1、愈伤组织细胞的分化一般分几个时期？各有何特点？ （1）诱导期（起动期）：是细胞准备分裂的时期。细胞大小几不变，内部发生生理生化变化，迅速合成蛋白质和核酸。
（2）分裂期：外层细胞分裂，中间细胞常不分裂，形成小芯。细胞分裂快，结构疏松，缺少结构，浅而透明。在原培养基上，细胞必分化，及时转移，其可无限制地进行细胞分裂，维持不分化状态。
（3）分化期：细胞在形态和生理功能上的分化，出现形态和功能各异的细胞。 2、优良的愈伤组织必须具备哪4个特性？
（1）高度的胚性或再分化能力，以便从这些愈伤组织得到再生植物
（2）容易散碎，以便用这些愈伤组织建立优良的悬浮系，并且在需要时能从中分离出全能性的原生质体
（3）旺盛的自我增殖能力，以便用这些愈伤组织建立大规模的愈伤组织无性系。 （4）经过长期继代保存而不丧失胚性，便有可能对它们进行各种遗传操作。 3、愈伤组织的形态发生有哪些情况？
（1）愈伤组织仅有根或芽器官的分别形成，即无根的芽或无芽的根；
（2）先形成芽，再在芽伸长后，在其茎的基部长出根而形成小植株，多数植物属这种情况；
（3）先产生根，再从根基部分化出芽而形成小植株。这种情况较难诱导芽的形成，尤其对于单子叶植物； （4）先在愈伤组织的邻近不同部位分别形成芽和根，然后两者结合起来形成一株小植株。少见。
单子叶植物：与双子叶植物诱导发生过程类似，只是在形态上无鱼雷形胚等阶段，成熟体胚上有盾片、胚芽鞘和胚根等结构。
4、简述细胞脱分化过程。
细胞的脱分化过程可分为3个阶段：
第一阶段为启动阶段，表现为细胞质增生，并开始向细胞中央伸出细胞质丝，液泡蛋白体出现；
第二阶段为演变阶段，此时细胞核开始向中央移动，质体演变成原质体； 5、影响植物离体形态发生的因素有哪些？（不是重点） （1）植物种类和基因型3 （2）培养材料的生理状态
发育年龄：一般幼态比老态组织形态发生能力高； 培养器官或组织类型：细胞分裂旺盛的器官较好；
培养时间和细胞倍性：一般取处于旺盛生长期的愈伤来诱导器官形成。 （3）培养基
a营养成分： 一般认为，培养基中的铵态氮和K+有利于胚状体形成，提高无机磷的含量可促进器官发生; 茎尖培养和芽诱导培养基主要是MS及其修改的培养和B5培养基; 碳水化合物种类及浓度对胚状体发育有重要作用,缺糖或低糖无法形成胚状体。 b 植物激素及生长调节剂
（起主导作用，通过影响内源激素的平衡起作用
c培养基的性质：愈伤组织诱导：在固体培养基上；细胞和胚状体的诱导在液体培养基上 （4）培养条件：光照；温度；气体；湿度等 6、分裂期愈伤组织的共同特征：
细胞分裂快，结构疏松，缺少有组织的结构，维持其不分化的状态，颜色浅而透明。 7、胚状体发生途径与器官发生途径形成植株的区别:
? ①胚状体具有两极性，即在发育的早期阶段，从其方向相反的两端分化出茎端和根
端；而不定芽和不定根都为单向极性。
? ②胚状体的维管组织与外植体的维管组织无解剖结构上的联系。而不定芽或不定根往往总是与愈伤组织的维管组织相联系。
? ③胚状体维管组织的分布是独立的“Y”字形。而不定芽的维管组织无此现象。 8、器官发生形成小苗的方式
? （1）愈伤组织仅有根或芽器官的分别形成，即无根的芽或无芽的根； ? （2）先长芽，后长根，多数情况；
? （3）先长根，再从根的基部长芽。这种情况较难诱导芽的形成，尤其对于单子叶植
物；
? （4）先在愈伤组织的邻近不同部位分别形成芽和根，然后两者结合起来形成一株植
株。
《器官和组织培养》复习题及参考答案
一、填空：
1、植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。
2、茎尖培养根据培养目的和取材大小分为茎尖分生组织培养 和 普通茎尖培养 两种类型。前者主要是对 茎尖长度不超过0.1mm，最小只有几十微米的 茎尖进行培养，目的是 获得无病毒植株；后者是对 几毫米乃至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的 培养，目的是离体快繁 。
3、不定芽产生的途径： 一是从外植体上直接产生
二是从由外植体诱导产生的愈伤组织上产生。
4、离体叶培养是指包括叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶等叶组织的无菌培养。 5、在离体叶培养中，6-BA和KT利于芽的形成；2,4-D利于愈伤组织的形成
二、名词解释：
1、植物器官培养（Organ Culture）：是指对植物某一器官的全部或部分或器官原基进行
离体培养的技术。分为营养器官（根、茎、叶）和繁殖器官（果实、种子、花器官）培养。
2、花器官培养：是指对植物的整朵花或花的组成部分（包括花托、花瓣、花丝、花药、
子房、胚珠）进行离体培养的技术。
3、植物分生组织(meristem culture)培养：是指对植物的分生组织进行离体培养的技
术，包括植物根尖、茎尖等顶端分生组织和形成层组织的培养。其中茎尖培养广泛应用于植物再生和脱病毒研究。
三：问答题：
1、离体叶组织中再生植株发生途径有哪些？
在离体叶组织脱分化和再分化培养中，茎和芽分化的4个途径： （1）直接产生不定芽
（2）离体叶-----愈伤组织------不定芽
（3）离体叶--------愈伤组织------胚状体 -----不定芽 （4）离体叶 → 小鳞茎或球状体 ↘愈伤组织 ↗ 2、根培养的取材部位：
答：一端切取长1.2厘米的根尖，接种于培养基中。这些根的培养物生长甚快，几天后发育出侧根。待侧根生长约1周后，即切取侧根的根尖进行扩大培养，它们又迅速生长并长出侧根，又可切下进行培养，如此反复，就可得到从单个根尖衍生而来的离体根的无性系。这种根可用来进行根系生理生化和代谢方面的实验研究。培养条件为暗光和25～27℃。 3、离体根培养的一般方法：
（1）100ml三角瓶，装40~50ml培养液； （2）液体培养， （3）反复继代培养， （4）流动式
4、根培养的培养基的选择：
? 无机离子较低
? White培养基或者其他培养基
? MS、B5也可用，但其浓度要稀释2/3或1/2 5、影响离体根生长的因素
? 1、基因型：品种差异大。
? 2、培养基：生根培养基—盐浓度为MS的一半或四分之一。
? 3、生长物质：适当的生长素，常用NAA和IBA，浓度为0.1-10.0毫克每升。但水
仙，草莓等无需激素。 ? 4、PH：中性偏酸。
? 5、光照和温度：暗培养和25～27℃ ★ 6、茎尖培养的含义：
是切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分，进行无菌培养。
★ 7、茎尖培养的类型：
茎尖分生组织培养：对长度0.1mm左右，含1-2个叶原基的茎尖进行培养，即微茎尖培养；目的是获得无病毒植株
普通茎尖培养：对几毫米至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养，目的是快速繁殖和用于植物开花生理的研究。
8、茎段的培养材料的选择、处理和培养基的调整
选择：取生长健壮无病虫的幼嫩枝条或鳞茎盘，若是木本，取当年生嫩枝或一年生枝条，剪去叶片，剪成3～4cm的小段。
处理：在自来水中冲洗1～3h，在无菌条件下用75％酒精灭菌30～60s，再用浓度为0.1％升汞浸泡3～8min，或用饱和漂白粉浸泡10～20min，因材料老嫩和蜡质多少而定时间。最后用无菌水冲洗数次，以备接种。
培养基的调整：最常用的基本培养基为MS培养基，加入3％蔗糖，用0.7％的琼脂固化。
9茎尖微繁过程有哪几个阶段
茎尖微繁殖过程一般包括五个阶段: 1 无菌培养的建立。 2 芽的增殖。 3 中间繁殖体的增殖。 4 诱导生根。 5 试管苗的移栽
《胚胎培养及离体授粉》复习题及参考答案
一、填空：
1、胚胎培养包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养。 2、离体胚的培养分为二种类型： 成熟胚 培养和 幼胚 培养。
3、胚珠培养分二类： 受精胚珠 的培养和 未受精胚珠 的培养。受精胚珠培养目的一是打破种子的休眠； 二是挽救胚的发育，以获得杂交种。未受精胚珠培养的目的是获得 单倍体植株 。
4、子房培养分 授粉子房 培养和 未授粉子房 的培养。前者培养的目的是挽救杂种胚，后者培养的目的是获得单倍体植株。
5、离体授粉的类型有离体柱头授粉、离体子房授粉、离体胚珠授粉。 6、离体胚培养方法：成熟胚和幼胚培养
7、胚珠培养的培养基：Nitsch或N5,B5,MS，子房培养的培养基：N6,MS
二、名词解释：
1、胚胎培养（embryo culture）： 指对植物的胚、子房、胚珠和胚乳进行离体培养，使其发育成完整植物的技术。包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养。 2、胚培养（embryo culture）：采用人工的方法将胚从种子、子房或胚珠中分离出来，再放在无菌的条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。 3、胚乳培养（endosperm culture）：是指将胚乳从母体上分离出来，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。 4、胚珠培养（ovule culture）：是指将胚珠从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。 5、子房培养（ovary culture）：是指将子房从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。
6、植物离体授粉：指将未授粉的胚珠或子房从母体上分离下来，进行无菌培养，并以一定的方式授以无菌花粉，使之在试管内实现受精的技术。
三、问答题：
1、胚培养的作用有哪些？
1)在远缘杂交育种中的应用:克服杂种胚不能正常发育 2)克服珠心胚的干扰,提高育种效率 3)缩短育种周期
4)测定休眠种子的萌发率 5)理论研究中的应用 2、简述离体授粉的程序
（1）确定开花、花药开裂及授粉时间 （2）去雄后将花蕾套袋隔离 （3）制备无菌子房或胚珠 （4）制备无菌花粉
（5）胚珠或子房的试管内授粉 3、胚胎培养的操作步骤。
? 取子房
? 常规表面消毒
? 解剖镜下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。 ? 固体培养
4、幼胚的发育方式：
1）胚性发育：继续进行正常的胚胎发育 2）早熟发育：迅速萌发成幼苗
3）产生愈伤组织：再分化形成多个胚状体或芽原基 。 5、胚胎培养的意义
①、克服远缘杂种的不育性
②、使胚胎发育不完全的植株获得后代 ③、缩短育种年限，提高育种效率 6、胚乳培养过程
? 胚乳外植体制备:种子消毒---取出胚乳
? 培养:White或MS诱导培养基---加入2，4-D或NAA0.5～2.0mg/L，BA 0.1～1.0mg
／L—— 25-27℃--暗或弱光
? 发育:约6～lOd胚乳开始膨大，再诱导形成愈伤组织----转到分化培养基上培养，分
化培养基可加入0.5～3.0mg／L的BA及少量的NAA。待愈伤组织长出芽后，切下不定芽，插入生根培养基中，光下培养10～15d，切口处可长出白色的不定根。
7、检查胚乳植株的染色体数目的方法
? 取根尖、幼叶或愈伤组织
? 0.2%-0.5%秋水仙素碱溶液在25℃浸泡4-8hr ? 流水冲洗5-10min
? 卡诺氏液或FAA液固定
? 1mol盐酸，60 ℃水浴8-10min ? 染色、压片、镜检、计数 8、胚珠培养的基本过程
1）、首先从花中取出子房进行表面消毒， 2）、然后在无菌的条件下进行解剖，取出胚珠，放在培养基上进行培养，