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C级背景下A级 轧盖空调系统 轧盖机(ZG400型) 模拟生产无菌灌装后产品压塞 2.5.1 公用设施及主要设备的验证情况 验证名称 厂房空调净化系统验证 清洁验证 是否完成 已完成 已完成 验证结论 冻干车间空调净化系统各项指标达到GMP要求 清洁效果达到验证要求 确认人 （2） 主要生产设备的验证情况
验证名称 LYO-15（SIP、CIP）型真空冷冻干燥机性能？ ZG400型轧盖机性能？ 已完成 满足冻干粉针剂生产的需求 已完成 满足冻干粉针剂生产的需求 是否完成 验证结论 确认人 （3） 验证前必须对设备的仪表进行校验并在有效期内。
（4） 系统检查：试验前检查真空冷冻干燥机真空系统，液压系统，电控系统运转是否
正常。
（5） 验证前必须确认本验证所用的西林瓶、胶塞和铝盖按相关操作规程清洗、灭菌并
符合规定要求。 （6） 人员培训
培训项目 GMP无菌制剂 人员进入洁净区培训 洁净室行为规范培训 防止污染与交叉污染 职业卫生知识 制剂车间应急处置方案演练 3 、 验证实施 3.1 验证步骤
培训人数 29 11 11 11 30 27 培训日期 2014.6.30 2014.7.14 2014.7.11 2014.7.10 2014.6.5 2014.7.8 培训课时 29 2 2 2 2 2 培训人
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3.1.1 西林瓶轧盖后负压保持试验
（1） 真空冷冻干燥机油压系统设置压力为4～6Mpa。
（2） 取5ml西林瓶100支，进行模拟作业，按《直线式灌装加塞机(KGS10A型)
标准操作规程》操作，将西林瓶半加塞后和托盘支架一起放入冻干箱内，按《真空冷冻干燥机标(LYO-15型)标准操作规程》抽真空至880mbar，在设定油压下全压塞，然后升高干燥箱压力后出箱。
（3） 出箱后目检压塞后外观。
（4） 为保证压塞后产品风险控制，将3.1.1（3）项下经压塞合格产品100支放置2
小时后放入色水中进行浸泡，检查是否有进入色水情况。
3.1.2 细菌挑战性试验 （1） 试验样品的制备
（a） 在生产线上取足够量的西林瓶，灌装经最长灭菌程序灭菌的 SCDM/2(大豆胰蛋
白胨肉汤)培养基，在冻干机内自动压塞后经轧盖机轧盖后将西林瓶密封。
（b） 将每一试样倒转，使培养基与西林瓶内表面充分接触，在 30～35℃下竖放培养
14 天。
（c） 小心去除60 个试样的铝盖，注意不要破坏其密封口。将去铝盖时不慎损坏容器
密封性的所有试样剔除。按3.1.2（1）（b）要求培养样品（在培养期内，当试验中发现任何带盖试样长菌时，则试验无效，须弃去全部试样，重新从头开始试验）。
（2） 确认培养基促菌生长能力——营养性试验
（a） 所有试样培养14 天均不长菌时，随机取20 个带盖试样，每个试样内接种0.1ml
的大肠埃希菌（Escherichia coli），菌液浓度：10～100CFU/0.1ml。
（b） 在30～35℃下培养7 天，或培养至所有试样都呈阳性结果。
（c） 若7 天内，所有接种大肠埃希菌的试样中，微生物生长良好，则容器内培养基
的促菌生长能力可判为合格。
使用紫外灯下观察肉汤呈蓝白色荧光的现象，来鉴定并确认试样容器内生长的
菌为大肠埃希菌。
（3） 挑战菌悬浮液的制备
（a） 从大肠埃希菌（Escherichia coli）的新鲜斜面上取一整环培养物，分别接入含lOml
无菌培养基的试管中，在30～35℃下培养16～18h。
（b） 将每管的培养物分别转入含1000ml 相同培养基(SCDM ／2)的容器内，于30～
35℃下培养22～24h。在培养结束时，明显见容器内培养基出现浑浊。
（c） 培养结束后的菌悬液即可用来作容器／密封系统完好性试验。 （4） 微生物侵入试验操作步骤
将3.1.2（1）（a）生产后的容器倒置并将瓶口完全浸没于高浓度（如大于105个
/ml）的运动型菌液中，如大肠埃希菌、铜绿假单胞菌或黏质沙雷菌，4小时后，
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将容器外表面消毒并培养，看是否有挑战性细菌在容器中生长。
（a） 将新鲜的大肠埃希菌（Escherichia coli）的菌悬液倒入合适的盆中，将试样西林
瓶倒置在菌悬液中。
（b） 将50 个灌装有经最长灭菌程序灭菌的 SCDM/2(大豆胰蛋白胨肉汤)培养基的试
样倒置，并浸入菌悬液中。该组试样为A 组。
试样西林瓶内的无菌培养基应充分接触封口内表面，样品的颈部及封口的外表
面应完全浸泡在菌悬液中，见图4-54 。
（c） 同时将25 个去铝盖的试样容器倒置入菌悬液中，该组试样为B 组。 （d） 试验开始时取一份菌悬液，平板计数每毫升所含的活菌数。按3.1.2（2）（c） 确
认试验用微生物是大肠埃希菌（Escherichia coli）。 （e） 将A 组和B 组试样容器在菌悬液中持续浸泡约4h。 （f） 浸泡结束时，再用平板计数菌悬液的浓度。
（g） 从菌悬液中取出试样，擦干试样容器外残余的菌悬液，然后用含0.5％过乙酸的
70％异丙醇消毒容器外表面。
（h） 取装满培养基有铝盖和去铝盖的样品各两个，作阳性对照。阳性对照用样品制备
方法同试样，但不经菌悬液浸泡，其外表用含0.5％过乙酸的70％异丙醇消毒。此后，接种入10～100CFU大肠埃希菌（Escherichia coli），按6.6.2进行培养基的营养试验。
（i） 将消毒后的容器放在塑料袋中，置30～35℃培养7天。操作中应特别注意不要损
坏B组无铝盖试样胶塞的密封性。 （j） 挑战试验用菌悬液经灭菌后丢弃。
（k） 将挑战试验用的试样培养7 天，观察试样容器内培养基中微生物的生长情况。 Ⅰ 对每一试样进行观察，有生长记作+，无生长计作－。
Ⅱ 如果试样容器长菌，按3.1.2（2）（c） 方法确认生长菌是挑战微生物——大肠埃
希菌。
Ⅲ 如果所有西林瓶都不长菌，则从浸过菌悬液的A 组取10 个试样，B 组取5 个
试样，分别按3.1.2（2）进行培养基的营养检查。 3.2 测试方法
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3.2.1 西林瓶压塞后负压保持试验
（1） 出箱后目检压塞后外观，胶塞与西林瓶是否配套。
（2） 为保证压塞后产品风险控制，将3.1.1（3）项下经压塞产品100支不进行轧盖，
放置2小时后，将西林瓶倒置于色水中，通过观察西林瓶内是否有色水，最终验证西林瓶与胶塞的气密性。 （3） 本验证试验连续进行三次。 3.2.2 细菌挑战性试验 （1） 结果评价
（a） 步骤3.1.2（2）、步骤3.1.2（4）（h）、步骤3.1.2（4）（k）Ⅲ 中进行的营养试验
都合格，试样的挑战试验才有效。 （b） 在挑战试验开始时，挑战用菌悬液浓度(活菌数)必须达到1×106 CFU/ml。 （c） 挑战试验中A 组和B 组如有长菌，需记录长菌的试样数。在A 组中如出现长菌
试验，则需按下述要求作进一步调查。
Ⅰ 仔细去除微生物生长的容器的盖和塞，检查容器封口是否有缺损，造成微生物侵
入。
Ⅱ 将观察到试样西林瓶封口的缺陷，采用拍照或及其他适当详细记录。
Ⅲ 如果任何挑战试验中长菌的容器不是由于容器封口明显的物理性缺损所致，容器
／密封系统挑战试验作失败论处。 （2） 贮存稳定性
Ⅰ 将剩余未经过挑战试验的容器放入箱中，保存在室温，黑暗处。 Ⅱ 在适当的时间间隔(12 个月、24 个月)后取出一些容器，重复挑战试验。 3.3 可接受标准
3.3.1 西林瓶压塞后负压保持试验：检查有真空西林瓶内没有色水，即符合要求。 3.3.2 细菌挑战性试验：培养基澄清不浑浊。