《人体解剖与生理学》实验
实验一 四种基本组织的自制临时装片及观察（必做）
※ 目的及内容
1．学习上皮组织和结缔组织及骨骼肌新鲜材料的平铺片的制作方法。 2．学习神经组织涂片的制作方法。
3．观察自制临时装片，了解四种基本组织的结构特征。 ※ 材料与用具
材料：青蛙或蟾蜍、猪膈肌、新鲜牛脊髓（以腰段粗大最好） 用具：常用解剖器械一套、载玻片、盖玻片、光学显微镜 染液：１％甲基蓝、１％醋酸溶液
1、单层扁平上皮组织的平铺片制作
用尼龙网袋装好青蛙或蟾蜍放入桶中加水，在水中浸泡０.５小时，表皮自然脱落。用镊子将黏附在尼龙网袋格子上的表皮夹入培育皿中存放备用。取一小块表皮放置载玻片上，用解剖针将其展平，待铺片干后，用１％的甲基蓝染色３分钟，将多余的染液用吸水纸从边缘吸干即可镜检。
特点：上皮细胞为多边形，细胞与细胞之间边界清晰，细胞核扁圆形，位于细胞中央。
2、疏松结缔组织的平铺片制作
将蟾蜍处死，剪开皮肤剪取一小块皮下结缔组织置一载玻片上，然后左右各持一解剖针，将组织撕开平铺载玻片上，用甲基蓝染色１５分钟，盖上盖玻片即可观察。
特点：①成纤维细胞—数目最多，胞质染色淡，轮廓不甚明显，仔细观察细胞呈
梭形或扁的星状，胞核大,多为椭圆形，染成蓝紫色。
②巨噬细胞——数量多分布广，细胞不规则，胞体圆形或卵圆形；胞核小，
为圆形、椭圆形或肾形，核染色为深蓝色。
③胶原纤维——排列成束彼此交织吻合, 纤维束常有分支 。
1
④弹性纤维——在疏松结缔组织中略呈黄色，折光性强，富有弹性，一般
较胶原纤维细, 纤维有分支，排列散乱。
3、神经组织涂片制作
将解剖针在脊髓灰质前角挑取半米粒大小的组织，置于洁净的载玻片上,涂成均匀而薄的一层，晾干后加２-３滴甲基蓝，约２-３分钟，用清水清洗后镜检。
特点：神经组织由神经元细胞和神经胶质细胞组成。 神经元由胞体和突起组成。
胞体—有圆形、梨形、梭形、锥体形及星形等。
神经元 树突：多个，呈树枝状突起，内含尼氏体。 突起 （胞质内许多被染成深蓝色的小块） 轴突：每个神经元只有1个轴突，轴突从胞体发出的部位
呈圆锥形隆起，着色较浅，称轴丘，没有尼氏体。
4、骨骼肌平铺片制作
取猪横隔肌剪成小块,用纯甘油浸泡3-4天，待用。
取猪横隔肌一小块,用解剖针将肌纤维分离,放到载玻片上,滴上一滴醋酸,在显微镜下观查。
特点：肌原纤维表面有肌膜，是多核细胞,呈细丝状。每条肌原纤维有明暗相间的横纹，而且明暗横纹皆整齐地排列在同一水平上，所以整个肌纤维显示出明暗相间的带。
【实验一】作业：
1．绘图说明蟾蜍单层扁平上皮细胞在平铺片上的形态。
2．绘图说明蟾蜍疏松结缔组织的纤维在平铺片上的形态特征及其细胞形态。 3．绘图说明骨骼肌的结构特点。 4．绘图说明多极神经元的形态特征。
2
补充知识： 单毁髓、双毁髓 蛙的制备
※ 单毁髓——只刺毁蛙的脑，保留完好的脊髓，就是脊蛙。 ※ 双毁髓——刺毁蛙的脑和脊髓。
1．左手握蛙，背部向上，用食指下压其头部前端，使头前俯，中指抵住其胸部，拇指按其背部，使头与脊柱相连处凸起。右手持毁髓针自两眼之间沿中线向后端触划，当触到一凹陷处即枕骨后凹。
2．将毁髓针由凹陷处垂直刺入，再将针尖从枕骨大孔向前刺入颅腔，并在颅腔内搅动，捣毁脑组织。如针确在颅腔内，则可感到针触及颅骨（图16－1）。
3．将针退回至枕骨大孔，然后针尖转向后方与脊柱平行插入椎管，一边伸入，一边旋转毁髓针以毁髓。当蛙四肢僵直而后又松软下垂时，即表明脑和脊髓完全破坏。如动物仍表现四肢肌肉紧张或活动自如，则必须重新毁髓。
4．拔出毁髓针，用一小干棉球将针孔堵住，以止其出血。
图：枕骨大孔的位置
枕骨大孔 蛙眼
3
实验二 坐骨神经——腓肠肌标本的制备（必做）
一、目的要求
1．学习捣毁蛙脑和脊髓的方法。
2．熟悉制备蛙类坐骨神经——腓肠肌标本的方法，为后面的实验打下基础。 二、实验原理
蛙或两栖类的一些基本生命活动及生理功能与温血动物近似，而且其离体组织需要的生活条件非常简单，易于控制和掌握。因此在生理学实验中，坐骨神经——腓肠肌标本是研究神经肌肉生理最常用的对象，经常用来研究神经肌肉的兴奋性、刺激与反应的规律、肌肉收缩的特点、兴奋性的周期性变化等。
三、实验器材和药品 实验对象：蟾蜍或蛙
实验器材：蛙类手术器械一套（金属探针1根，粗剪刀，尖头镊子、眼科镊子各1把，玻璃分针2根），蛙板1块，培养皿，滴管，废物缸、锌铜弓，丝线，棉花；任氏液。
四、实验步骤（见课本）
五、实验要求与注意事项
1．熟悉蟾蜍手术器械的使用，了解蟾蜍腿部的局部解剖及坐骨神经的走行。 2．避免损伤蟾蜍背部的腺体（尤其是眼后的大腺体），防止其分泌物溅入眼内或污染标本。
3．勿剪破蟾蜍内脏，并及时清洗手及用过的器械；已剥去皮肤的组织应避免接触蟾蜍皮肤或其他不洁物；以防标本被污染。
4．游离神经、肌肉时不可过度牵拉，应避免用手指、金属器械接触或夹持标本的神经肌肉部分，更不能用自来水冲洗标本。
5．制备过程中应经常向标本上滴任氏液，防止神经因干燥而失去正常兴奋性。标本制成后须放在任氏液中浸泡数分钟，使标本兴奋性稳定。
6．移动制备好的标本时，先将游离的神经搭在腓肠肌上，再用双手分别提拿跟键和股骨断端，防止神经受力过重。
7．检查标本的兴奋性：用被任氏液浸湿的锌铜弓接触坐骨神经，如腓肠肌迅速收缩，则表示标本的兴奋性良好，可供有关神经肌肉生理实验用。
4
六、分析与思考
1．通过制备坐骨神经-腓肠肌标本，你对生理学实验有何感想？
2．损毁脑和脊髓后的蟾蜍有何表现？若破坏脊髓不彻底，蟾蜍的四肢会有什么表现？为什么？
3．为什么在本实验中应经常给标本滴加任氏液？
4．锌铜弓为何能用来检查标本的兴奋性？若无锌铜弓，能否用其他方法来检查标本的兴奋性？
※ 七、注意事项
1．制备标本过程中，要不断滴加任氏液，以防标本干燥，丧失正常生理活性。 2．已剥离皮肤的组织避免接触皮肤毒液或其他不洁物，也不要用水冲洗，以 免影响组织机能。
3．分离神经时，一定要用玻璃分针。不得用手指或金属器械接触或夹持标本 的神经肌肉部分，以免造成损伤。
4．分离神经时，一定要把周围结缔组织剥离于净。 5．实验要迅速，以免时间过长影响标本活性(兴奋性)。
八、作业：1.制备蛙坐骨神经——腓肠肌标本时，如何保持标本的机能正常？
2.锌铜弓刺激检测标本活性的原理是什么?
5