实验三 反射弧的分析与反射时的测定（必做）
一、实验目的
观察某些脊髓反射，学习测定反射时的方法，分析反射弧组成部分的功能及其完整性与反射活动之间的关系。
二、实验原理
在中枢神经系统参与下，机体对刺激产生的规律性反应称为反射。反射过程中生物信号经反射弧传递需要一定时间，从刺激开始至反射出现所需的时间为反射时，即兴奋通过反射弧而引起外周效应所需要的时间。反射时可通过简单的方法初步测定。同时，反射只有在反射弧结构和功能完整的基础上才能进行，若组成反射弧的感受器、传入神经、神经中枢、传出神经和效应器五部分中的任何一部分受到破坏，反射均不会发生。
三、实验器材和药品 实验对象：蟾蜍或蛙
实验器材：BL－410生物机能实验系统，蛙类手术器械一套，蛙板，玻璃板，铁支架，肌夹，双凹夹，刺激电极，培养皿，滴管，线，干棉球，秒表；
药品：任氏液，0.3﹪、0.5﹪稀硫酸，食盐结晶颗粒纸，普鲁卡因
四、实验方法和步骤
1．制备脊蟾蜍取蟾蜍一只，用纱布裹紧蟾蜍的上下肢和躯干，露出头部。用剪刀开口的一侧伸入蟾蜍口裂根部，另一侧置于背部，齐鼓膜后缘剪去动物的头部，保留下颌和脊髓，即成脊蟾蜍。用棉球作创口止血。 2．固定用肌夹固定蟾蜍下领，将其悬挂在铁支架上。
3．仪器调试打开计算机，进入BL－410生物机能实验系统操作界面，选择输入信号→1通道→肌电信号。调整刺激参数为：波宽1ms，强度3－6V，频率50－70Hz，连续单刺激。
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4．观察项目
(1) 反射时测定：将蟾蜍右下肢的趾尖浸入稀硫酸液中，同时开动秒表记录从浸入至肢体反射的时间。反射发生后用清水反复洗去皮肤上的稀硫酸，用棉球擦去清水。重复测定三次，求时间平均值，此值即为反射时。
(2) 反射弧的分析：
①在右下踝关节上方作一环行皮肤切口，将趾部皮肤剥去，再用硫酸分别刺激左右两侧趾尖，观察两侧肢体各有何反应。
②剪开左侧大腿内侧皮肤，在股二头肌和半膜肌之间找出坐骨神经，游离1cm后做双结扎，并在两结扎线中间剪断神经，再用稀硫酸刺激该侧脚趾，观察反应如何。
③启动BL－410生物机能实验系统的电刺激器，以重复电刺激坐骨神经中枢端观察同侧和对侧肢体的反应有何不同。
④用金属探针破坏脊髓后，重复步骤③，观察反应。 ⑤重复电刺激坐骨神经外周端，观察同侧反应。 ⑥直接电刺激左侧腓肠肌，观察反应如何。
五、实验要求与注意事项
1．制备脊蛙时，颅脑离断的部位要适当，太高因保留部分脑组织而可能出现自主活动，太低又可能影响反射的产生。
2．剥掉趾部皮肤时，一定注意趾尖不要残留皮肤，否则刺激仍能引起反射。 3．每次用稀硫酸刺激时，浸入部位应限于趾尖，浸泡范围也应一致，切勿浸入太多；而且浸入时间最长不超过10秒。
4．每次用硫酸刺激后，均应迅速用水洗去蛙趾皮肤上的硫酸，以免皮肤受伤。洗后应沾干水渍，防止再刺激时硫酸被稀释。
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六、分析与思考
1．记录：脊蛙的反射时
序
刺激
刺激 部位
1 2 3 4 5
0.3%硫酸 0.5%硫酸 0.5%硫酸 0.5%硫酸 1%硫酸
右后肢最长趾 右后肢最长趾 蛙背部 蛙腹部 蛙背部
屈反射 屈反射 搔趴反射 搔趴反射 搔趴反射 项目
结果（s） 1
2
3
平均值 （s）
2.剥净长趾上的皮肤后用硫酸刺激去皮的长趾 反射现象？（有没有） 3.分离出坐骨神经后，在细棉条上滴普鲁卡因溶液后用硫酸刺激有皮肤的趾 （ 有没有 ） 反射现象？
4．取浸有硫酸溶液的滤纸片贴于蛙的腹部 （有没有） 擦或抓反 射的现象？
结论：
6．思考题：
1．反射弧由哪几部分组成？分别起什么作用？ 2．反射的生理意义及种类有哪些？ 3．反射时的长短与哪些体内外因素有关？
4．右侧坐骨神经被剪断后，动物的反射活动发生了什么变化? 这是损伤了反射弧的哪一部分?
5．剥去趾关节以下皮肤后，不再出现原有的反射活动，为什么?
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实验四 蛙心起搏点的观察与分析（选做）
一、目的要求
1．学习暴露蛙心脏的方法，熟悉蛙心脏结构。 2．观察心脏各部分活动情况及搏动的先后次序。
3．通过结扎阻断静脉窦与心房之间、心房与心室之间兴奋的传导，观察分析蛙心节律性活动的起源，以及正常心脏的传导系统在心搏活动中的作用。 二、实验原理
心脏活动具有自律性，但各部分的自律性高低不同。窦房结的自律性最高。其每次兴奋依次激动心房、心室，引起心脏各部分的顺序活动。
正常生理情况下窦房结为心脏的正常起搏点，其他部位的自律细胞称为潜在起搏点，当窦房结的兴奋传导受阻时，潜在起搏点可取代窦房结引发心房或心室活动。两栖类动物的心脏起搏点称静脉窦。
三、实验器材和药品 实验对象：蟾蜍或蛙
实验器材：蛙类手术器械一套，蛙板，玻璃板，蛙腿夹，滴管，细线，秒表；
任氏液。还需 盛有约40℃温水的小试管，盛0℃冰水的小试管。
四、实验方法和步骤
1．暴露心脏
(1) 将双毁髓蛙背位置蜡盘中，展开四肢，用大头针于腕部钉入，以将蛙固定在蜡盘中。 ★ 为什么用双毁髓蛙进行心搏起源的分析？
(2) 左手持镊提起胸骨后方腹部皮肤，右手持剪剪开一小口，然后将剪刀由切口处伸入皮下，向左右两侧锁骨的外侧方向剪开皮肤，并向头端掀开皮肤。
(3) 再用镊子提起胸骨后方的腹肌，用金冠剪在腹肌上剪一小口后，沿皮肤切口方向剪开胸壁， ★剪时剪刀尖紧贴胸壁，以免损伤内脏和血管，剪断左右乌喙骨和锁骨，剪去胸壁，使创口成1个倒三角形，此时可见到心脏在心腔内搏动。
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(4) 左手持眼科镊提起半透明围心膜，右手用眼科剪剪开围心膜，暴露心脏。
★实验中应不时用任氏液保持心脏湿润。为什么？
2．观察心蛙心结构 如图16－2，从心脏腹面识别静脉窦、心房、心室，然后用玻璃分针将心尖翻向头端，再从背面辨认。可见心房与静脉窦之间有一半月形白线，即窦房沟。用眼科镊子在主动脉干下穿线备用。
3．观察心搏过程
观察静脉窦、心房和心室收缩的顺序，并用秒表记录心搏频率。 ★ 注意心室收缩时容积和颜色的变化。
4．不同温度刺激蛙心各部位
用盛有约40℃温水的小试管底部分别接触心房、心室和静脉窦1 min，重复3次并记录每次温度刺激时心脏各部位的搏动频率。
换用盛冰水的小试管，重复上述试验并记录。
★小试管底部接触所刺激部位时，不能接触到心脏其他部位，以免影响实验结果。根据实验结果，分析心脏何部位的搏动为心搏的起源。
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