实验二 真菌菌丝DNA提取
1实验目的
学习利用CTAB法少量提取真菌菌丝体DNA，同时掌握在DNA提取中各种试剂的作用和操作的目的。 2 实验步骤 1）真菌的培养
把真菌接种在在PDA上平板上， 25℃条件下培养7-10天。 2）DNA的提取
（1）研磨。用牙签挑取菌丝放入灭菌的1.5mL离心管中（1/4体积），加500μL 2?CTAB提取液 (100mmo1/L Tris-HCl pH 8.0，1.4mo1/L NaCl，20mmo1/L EDTA，2% CTAB, 0.1%-2%β-巯基乙醇)，用研磨棒研磨。 （2）水浴。将混合液放入65℃水浴lhr。
（3）抽提。加入等体积的氯仿/Tris-饱和酚(1:1)混合液，12,000r/min离心l0min，取上清液放入另一个灭菌的1.5 mL离心管中。
（4）再提。在上清液中加入等体积的氯仿/异戊醇（24:1)混合液，12,000r/min离心l 0min，取上清液放入另一个灭菌的1.5 mL离心管中。
（5）沉淀。于上清液中加3mo1/L醋酸钠40μL，再1mL无水乙醇，混匀后置于-20℃冰箱中沉淀30min或过夜，12,000r/min离心l 0min，弃上清液，收集沉淀。
（6）洗涤。再加入300μL的70%乙醇清洗沉淀，12,000r/min离心5min，弃上清液(防止倒流)，收集沉淀，置37℃的恒温箱中干燥10min。
（7）溶解。在干燥后的离心管中加入10μL TE，电泳检测。
（8）保存。将通过电泳检测的总DNA放入-20 ℃冰箱中保存备用。
3 结果分析