超声波提取法:准确称取粉碎的样品1 00g于25mL具塞试管中,加水至刻度约7 5mL混匀,再加5~6mL丙酮,混匀,超声提取30~120min后,加2~3mL石油醚,混匀,超声15min,静置分层,如不能分层则将混合液离心5min。移出上清液,下层水溶液加石油醚2mL,混匀。重复上述操作2次,合并上清液于10mL离心管中,经氮吹浓缩仪浓缩至2 0~3 0mL(依上清液的浑浊程度而定),加入0 5mL浓硫酸,振荡1min,以3000r/min离心5min,取上清液供色谱分析。
涡旋振荡提取法:准确称取粉碎的样品1 00g于25mL具塞试管中,加水至刻度约7 5mL混匀,再加5~6mL丙酮,于涡旋振荡器上振荡2min,然后加2~3mL石油醚,再于涡旋振荡器上振荡2min,静置分层,如不能分层则将混合液离心。移出上清液,下层水溶液加石油醚2mL,混匀。重复上述操作2次,合并上清液于10mL离心管中,经吹氮浓缩仪浓缩至2 0~3 0mL(依上清液的浑浊程度而定),加入0 5mL浓硫酸,振摇1min,以3000r/min离心5min,取上清液供色谱分析用。
2 结果与讨论
2 1 不同提取方法提取效率的比较
分别采用超声波提取、涡旋振荡提取和索氏提取后,气相色谱法测定了茶叶、灵芝、陈皮和菜干4种植物性食品中六六六、滴滴涕8种异构体农药的残留量,比较发现,采用以上3种前处理技术的检
食品
测结果无明显差别。并用以上3种提取方法对茶叶中六六六、滴滴涕8种异构体在2、5、10 g/kg(相当于六六六、滴滴涕各异构体总和为8、20、40 g/kg)3个添加水平进行回收率实验,每个添加水平平行测定5次,有机氯农药标准、茶叶和茶叶加标10 g/kg的色谱图见图1。结果表明,8种六六六、滴滴涕异构体均有较好的回收率,涡旋振荡提取法、超声波提取法、索氏提取法的回收率分别为80%~109%、85%~111%、83%~114%,相对标准偏差小于15%,均满足对六六六、滴滴涕等有机氯农药残留量的检测要求,六六六、滴滴涕各异构体的定量下限达2 g/kg(见表1)。但索氏提取消耗有机试剂多,耗时长,操作繁琐,不能同时进行多个样品处理,且其提取的分析物杂质较多,在振荡提取和超声波提取的提取效率满足检测要求时,一般不采用此法。涡旋振荡提取法与超声
图1 有机氯农药标准(A)、茶叶样品(B)与茶叶
加标样品(C)的色谱图
Fig 1 Chromatogramsoforganochlorinepesticidestandard
(A),tea leafsample(B)andtea leafspikedwith
organochlorinepesticidesstandard(C)
1. BHC,
2. BHC,3. BHC,4. BHC,5.pp DDE,
6.op DDT,7.pp DDD,8.pp DDT
波提取法均有消耗试剂少、耗时短、操作简便、可同时进行多个样品处理的优点,但涡旋振荡提取法耗时更短,一般在20min内可完成前处理,如需离心较难分层的样品在40min内也能完成前处理,可
以作为茶叶、中药材、脱水蔬菜中有机氯农药残留的快速检测方法加以推广。
表1 采用不同提取方法测定的不同样品的有机氯农药残留量(n=5)
Table1 Resultoforganochlorinepesticideresiduesfromrealsamplestreatedwithdifferentpretreatmentmethods(n=5)
SampleTealeaf(茶叶)
1#
2#3#1#2#
AddedwA/( g kg
-1
BHCresiduesofallisomersw/( g kg-1))OriginalFoundRecoveryR/%
-*
-----------9 1,8 5,7 8,8 8,8 3,8 5,8 5,7 6,7 3,8 3,7 2,7 4,
21 9,44 2114,110,110
19 3,37 3106,96,9318 7,35 922 5,38 717 8,36 416 6,33 319 7,37 517 3,35 817 8,34 918 4,43 717 5,38 317 3,38 72#:
98,94,90
110,112,97104,89,91106,83,83106,98,9495,86,9091,89,87104,92,10990,88,9692,86,97
DDTresiduesofallisomersw/( g kg-1)
OriginalFoundRecoveryR/%25 524 224 526 524 024 212 811 813 046 044 546 0
34 6,33 1,31 6,34 7,32 8,32 5,20 5,19 3,19 6,54 9,53 4,53 1,
47 1,71 0114,108,114
43 6,68 4111,97,11042 3,64 243 2,67 243 7,68 140 4,63 728 9,51 033 6,54 4
89,89,102,84,110,98,
99
102110
8,20,408,20,408,20,408,20,408,20,408,20,408,20,408,20,408,20,408,20,408,20,408,20,40
Glossyganoderma(灵芝)
3#Dehydratedcabbage(菜干)1#
2#3#
Driedtangerinepeel(陈皮)1#
2#
3#
*nodetected;1#:oscillationextraction
104,81,9996,80,9694,109,106
97
10892107
33 0,51 782,100,66 5,89 0111,102,64 3,81 5111,99,67 8,77 3
89,109,
sampletreatedbysoxhletextraction;sampletreatedbyultrasonicextraction;3#sampletreatedbyvortex
2 2 各因素对提取效率的影响
一般认为样品的颗粒大小、浸泡时间及提取时间等因素均直接影响提取效率。本文将茶叶、灵芝、菜干分别粉碎过20、40目(孔径分别为0 83、0 38mm)筛处理,发现采用以上3种提取方法的检测结果基本相同。分别称取茶叶、灵芝、菜干样品平行多份加入水和丙酮后,将其中的部分样品分别立
即进行涡旋振荡提取和超声波提取,其余样品则放置4h和15h后再进行提取,发现检测结果无明显差别,故茶叶、中药材和脱水蔬菜的前处理无需浸泡即可完全提取。将茶叶、灵芝、菜干样品分别提取4、6、8h,发现检测结果无明显差别,但提取时间越长,分析物中的杂质含量越多,4h时即可提取完全。以上样品在各实验条件下重复测定3次,RSD为1 0%~9 6%,完全满足日常检测要求。
食品
2 3 方法的线性范围与灵敏度
将标准储备液以石油醚稀释,配制成适当浓度的农药混合液,按 1 2 色谱条件进行测定,以峰面积(Y)对相应的标准质量浓度(X,mg/L)作线性回归,相应的回归方程和相关系数见表2。检出限为被测组分的分析信号被确证所需的该组分的最小浓度。本文检出限为LOD=3Sb/Sx,其中Sx为分析校准曲线斜率,Sb为背景噪音的标准偏差。
表2 8种农药的线性方程、相关系数、线性范围与检出限Table2 Linearequations,correlationcoefficients,linear
rangesanddetectionlimitsofeightpesticides
Compound BHC
BHC BHC
LinearequationY=157221X-32 34
Y=134689X-15 19Y=63076X+10 49