E.2 术语和定义
下列术语和定义适用于本方法。 E.2.1
真菌总数 total fungi count
集中空调系统送风中采集的样品,计数在沙氏琼脂培养基上经28℃、5 d培养所形成的菌落数。 E.3 仪器和设备 见D.3。 E.4 培养基
E.4.1 沙氏琼脂培养基成分: 蛋白胨 10 g 葡萄糖 40 g 琼脂 20 g 蒸馏水 1 000 mL
E.4.2制法:将蛋白胨、葡萄糖溶于蒸馏水中,校正pH为5.5~6.0,加入琼脂,115℃,15 min灭菌备用。 E.5 采样 见D.5。 E.6 检验步骤
将采集真菌后的沙氏琼脂培养基平皿置28℃培养5d,逐日观察并于第5天记录结果。若真菌数量过多可于第3天计数结果,并记录培养时间。
E.7 结果报告
E.7.1 送风口真菌总数测定结果:菌落计数,记录结果并按稀释比与采气体积换算成CFU/m(空气中菌落形成单位每立方米)。
E.7.2集中空调系统送风中真菌总数测定结果:一个系统送风中真菌总数的测定结果按该系统全部检测的送风口真菌总数测定值中的最大值给出。
附录F(规范性附录)集中空调送风中β-溶血性链球菌检验方法 F.1 总则
本附录规定了用培养法测定集中空调系统送风中的β一溶血性链球菌。 F.2 术语和定义
下列术语和定义适用于本方法。 F.2.1
β一溶血性链球菌 β-hemolytic streptococcus 集中空调系统送风中采集的样品,经35℃~37℃、24 h~48 h培养,在血琼脂平板上形成的典型菌落。 F.3 仪器和设备 见D.3。 F.4 培养基
F.4.1 血琼脂平板成分:
3
蛋白胨 10 g 氯化钠 5g 琼脂 20 g
脱纤维羊血 5 mL~10 mL 蒸馏水 1000 mL
F.4.2制法:将蛋白胨、氯化钠、肉膏加热溶化于蒸馏水中,校正pH为7.4~7.6,加入琼脂,121℃20 min灭菌。待冷却至50℃左右,以无菌操作加入脱纤维羊血,摇匀倾皿。 F.5 采样 见D.5。 F.6 检验步骤
F.6.1 培养方法:采样后的血琼脂平板在35℃~37℃下培养24 h~48 h。
F.6.2 结果观察:培养后,在血琼脂平板上形成呈灰白色、表面突起、直径0.5 mm~0.7 mm的细小菌落,菌落透明或半透明,表面光滑有乳光;镜检为革蓝氏阳性无芽孢球菌,圆形或卵圆形,呈链状排列,受培养与操作条件影响链的长度在4个~8个细胞至几十个细胞之间;菌落周围有明显的2 mm~4 mm界限分明、完全透明的无色溶血环。符合上述特征的菌落为β溶血性链球菌: F.7 结果报告
F.7.1 送风口β一溶血性链球菌测定结果:菌落计数,记录结果并按稀释比与采气体积换算成CFU/m(空气中菌落形成单位每立方米)。
F.7.2 集中空调系统送风中β一溶血性链球菌测定结果:一个系统送风中β一溶血性链球菌的测定结果按该系统全部检测的送风口β一溶血性链球菌测定值中的最大值给出。 附录G(规范性附录)集中空调送风中嗜肺军团菌检验方法 G.1 总则
本附录规定了用液体冲击法测定集中空调系统送风中的嗜肺军团菌。 G.2 术语和定义
下列术语和定义适用于本方法。 G.2.1
嗜肺军团菌 legionella pneumophila
样品经培养在GVPG琼脂平板上生成典型菌落,并在BCYE琼脂平板上生长而在L-半光氨酸缺失的BCYE琼脂平板不生长,进一步经生化实验和血清学实验鉴定确认的菌落。 G.3 仪器和设备
G.3.1 微生物气溶胶浓缩器:采样流量≥100 L/min.,对于直径3.0μm以上粒子其捕集效率≥80%或浓缩比≥8。 G.3.2 液体冲击式微生物气溶胶采样器:采样流量7 L/min-15 L/min.,对于0.5μm粒子的捕集效率≥90%。
3
G.3.3 离心管:容积50 mL。 G.3.4 平皿:Φ90 mm。
G.3.5 CO2培养箱:35℃~37℃。 G.3.6 紫外灯:波长360 nm±2 nm。 G.3.7 涡旋振荡器。
G.3.8 普通光学显微镜、荧光显微镜。G.3.9 水浴箱。 G.4 试剂和培养基
G.4.1 采样吸收液1-GVPC液体培养基G.4.1.1 GVPC添加剂成分: 多粘菌素B硫酸盐 10 mg 万古霉素 0.5 mg 放线菌酮 80 mg
G.4.1.2 BCYE添加剂成分: α一酮戊二酸 1.0 g
N-2酰胺基一2胺基乙烷磺酸(ACES) 氢氧化钾 2. 88 g L-半胱氨酸盐酸盐 0.4 g 焦磷酸铁 0. 25 g G.4.1.3 吸收液成分: 活性碳 2g 酵母浸出粉 10 g
10.0 g