1、标本采集
（1）、申请单标记必须清楚(姓名、性别、年龄、病例号、临床诊断、标本来源、采集时间、检查项目、抗生素应用情况等)，以便实验室能够合理选择培养环境和培养基；
（2）、尽量在抗生素应用前采集标本，以提高阳性检出率和避免漏检； （3）、标本采集应严格执行无菌操作；
（4）、咽拭、肛拭、伤口拭子等拭子标本，应插入运送培养基送检； （5）、痰、尿液、伤口拭子等混有正常菌群的标本，不可放入肉汤培养基内送检；
（6）、采集标本的容器必须经灭菌处理，但不可用消毒剂。 2、标本运送
（1）、标本采集后应尽快送到微生物实验室；
（2）、标本采集后在室温下超过2h未送达实验室，可视为不合格标本。 3、标本验收
（1）、实验室只能接受和处理合格标本；
（2）、实验室对不合格标本退回必须说明原因，并应及时与临床联系。 4、注意事项
（1）、微生物检验样本必须按要求采集转运，否则将影响检查结果．并给评价其意义带来麻烦甚至误导。
（2）、微生物样本极易被污染，污染的样本杂菌大量繁殖抑制病原菌生长，条件致病菌也是致病菌，如污染条件致病菌将误导临床，造成对患者的损害以及经济和时间的浪费。
（3）、某些标本离体极易死亡，应在床边采取和接种或立即保温送至实验室检验。室温放置或延迟送检，可使检出的阳性率降低；不能使用冷藏的样本检验。 （4）、厌氧菌样本采取必须隔绝空气，混入空气的样本影响检验结果，不能使用。
（二）、微生物学检验标本采集和处理 1、尿液标本采集和处理
通常留取晨起第一次尿液(此时尿液在膀胱内储存 4h 以上)；尿液采集后要及时送检，并保证 2h 内接种；不能及时送检和接种时，尿液应置 4～8℃冰箱保存；冷藏标本应于 8h 内接种；怀疑沙门氏菌感染时，应于发病2w左右采集尿液，怀疑钩端螺旋体感染时，应于发病后 2w采集尿液，上述时间此时阳性率高。尿液微生物学检验标本采集方法如下：
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（1）、中段尿采集法：成年男性和女性分别用肥皂水或 1：1 000高锰酸钾水溶液清洗尿道口和外阴部，再用灭菌水冲洗尿道口，无菌生理盐水冲去消毒液，然后排尿弃去前段尿液，收集中段尿 5～1 0ml盛于带盖的无菌容器内送检。 （2）、导尿法：用导尿管导取 10～15ml 尿液，置灭菌容器中送检；长期留置导尿管者应更换新导尿管留尿；留置导尿时，用无菌消毒法消毒导尿管外部及导尿管口，用无菌注射器通过导尿管抽取尿液送检(不可采集尿液收集袋中的尿液送检)；
（3）、集尿法：怀疑结核分枝杆菌感染时，于清洁容器中留取 24h尿液，取其沉渣1 0～1 5ml送检。
（4）、耻骨上膀胱穿刺法：培养结果与临床病情矛盾时可采用此法，一般较少应用；
（5）、肾盂尿采集法：必须由临床医生采集。
注意事项：正常人的尿液是无菌的，除外尿道有正常菌群外，还有条件致病菌，而这些细菌又是尿路感染中常见的致病菌，故应该注意无菌采集。 2、粪便标本采集和处理 （1）、采集时间：
① 腹泻患者于急性期，尽量在用药前采集粪便；② 伤寒患者于发病2w以后采集粪便；③ 怀疑霍乱时立即采集粪便送检。 （2）、采集方法：
① 自然排便法：取新鲜粪便的黏液、脓血、或絮状物等有意义成分，2～3g或 1～2 m1，盛无菌容器内或置于保存液或增茵液内送检；若疑似霍乱者应置于碱性蛋白胨水中(PH8.6)。② 直肠拭子法：难以获得粪便或排便困难患者及幼儿可采用此法，将拭子前端用无菌甘油或生理盐水湿润,然后插入肛门约 4～5cm(幼儿 2～3cm)，轻轻在直肠内旋转。擦取直肠表面粘液后取出，盛于无菌试管中或保存液中送检。
3、痰及下呼吸道标本采集和处理
（1）、自然咳痰法：①晨痰为佳；②先冷开水洗漱、清洁、口腔和牙齿；③再用力咳出呼吸道深部的痰，吐至无菌容器中；④痰量不得少于1ml；⑤痰咳出困难时可先雾化吸入 NaCI溶液(100g／L，加温到45℃)使痰容易咳出。查结核分枝杆菌，应留取24小时痰。
（2）、小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，将拭子深入咽部，小儿因压舌板刺激引起咳嗽，喷出的肺或气管分泌物粘在拭子上即可送检。
（3）、支气管镜、支气管穿刺、支气管肺胞灌洗等采集法，此采集方法必须
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由医生操作。
① 气管导管法：气管插管吸取下呼吸道痰液；② 气管镜采集法：用气管镜在肺内病灶附近用导管吸取或活用支气管刷直接取得。
（4）、呼吸道标本采集方法：鼻咽拭子法，先用清水漱口，对光坐，头向上仰，口张大，用压舌板轻压舌根，用棉拭子在病人咽后壁，悬雍垂后侧涂抹数次．立即放入无菌试管中。
注意事项：痰经过口腔，所以患者应用清水漱口数次，尽量排除口腔内大量杂菌。 4、血液及骨髓培养标本 （1）、血培养标本采集指征：
对入院的危重患者未进行系统性抗生素治疗前，应及时进行血液培养，患者出现以下体征可作为血培养的重要指征：
① 发热(≥38℃)或低热(≤36℃)；② 寒热；③ 白细胞增多(>10×109／L，特别是在有“核左移”未成熟的或带状的白细胞增多时)；④ 粒细胞减少(成熟的多核白细胞<1×109／L)；⑤ 血小板减少；⑥ 皮肤粘膜出血；⑦ 昏迷；⑧ 多器官衰竭。
（2）、最常用的方法为血液增菌培养法。培养瓶分为需氧瓶和厌氧瓶两种。每瓶需要 8～10ml。儿童瓶为需氧瓶每瓶需血液1～3ml，另外，脑脊液和胸腹水也可用血液增菌培养瓶，但仅需要儿童瓶，标本量与血液相同。
① 抗生素治疗前，严格无菌静脉采血 8～10ml(儿童 l～4m1)；② 无菌注入专用培养瓶(成人、儿童、需氧菌、厌氧茵、L型茵需要不同培养瓶)中送检；③ 如已用抗生素不能停用时，可于48h内分别于下次用抗生素之前，采取 6份血液标本送检；④ 必要时可需氧菌、厌氧茵(占10％)和 L型菌同时培养；⑤ 疑为心内膜炎时，为提高阳性检出率，可酌情不同部位、不同时间，多次采血或动脉采血进行培养；⑥ 必要时可取骨髓l～2 ml，无菌注入专用培养瓶中送检。 注意事项：血液在正常情况下为无菌标本，应严格按照无菌操作，避免杂菌污染。一般病人在发病初期 1~2天或发热高峰时采集血液标本，用一次性注射在肘静脉采血，采血前局部皮肤应彻底消毒。对亚急性细菌性心内膜炎等病人，应从肘动脉或股动脉采血为宜。 5、脑脊液
（1）、采集时间：怀疑脑膜炎时应立即采集脑脊液，最好是在应用抗生素之前采集脑脊液。
（2）、采集方法：无菌腰穿采集脑脊液3～5 m1 分装到 3 个无菌小瓶中(各 1～2m1)。用于细菌和病毒检测时脑脊液量不少于1 m1；用于真菌和抗酸杆菌检
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测脑脊液量不少于 2m1。 6、穿刺液培养标本
（1）、穿刺液培养标本包括胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液等。 （2）、采集时间：一般在用抗生素等抗菌药物治疗之前，或在停止使用抗菌药物之后 2～3d采集标本。 （3）、采集方法
① 无菌操作穿刺抽取标本或外科手术采集标本；② 标本采集量应>1ml(结核分支杆菌培养时应为 l～5m1)；③ 标本采集后注入无菌小瓶或无菌试管中立即送检；④ 可在盛器中先加入灭菌肝素然后再加入穿刺液，以防止穿刺液凝固(0.5ml肝素可抗凝 5ml标本)。 7、胃液及胆汁培养
标本抽取空腹胃液5 ml，置无菌管内送检；胆汁培养标本由十二指肠引流法或胆囊穿刺法或手术中留取胆汁，采集胆汁量为5 ml，置无菌管内送检；胃液和胆汁采集后必须立即送检。 8、脓汁和病灶分泌物培养
标本采集前局部消毒后无菌采取脓汁或病灶分泌物或组织。标本采集后立即置无菌管内送检。
9、眼、耳、鼻、咽拭子培养标本
（1）、采集眼分泌物：先用无菌生理盐水冲洗眼部,然后用棉拭于拭干，再用无菌棉拭于采集分泌物。
（2）、采集咽分泌物：先用清水撤口．用压舌板将舌向下向外压，将咽拭子在咽后壁或悬雍垂后侧涂抹数次，切勿接触口腔和舌粘膜。
（3）、采集耳、鼻或鼻咽分泌物：直接用拭子涂抹病灶部位,切勿接触周围粘膜或皮肤。标本采集过程中应注意避免粘膜上的正常菌群污染,标本采集后连同拭子一起置无菌管内送检。 10、泌尿生殖道培养标本
（1）、尿道分泌物：清洗尿道、采取尿道、溢出的脓性等分泌物,或用无菌拭子插入尿道 2-4cm处轻轻转动后取出,置无菌试管中送检。
（2）、阴道、宫颈分泌物、通过阴道扩张器,用灭菌拭子采取阴道口或宫颈管 1-2cm处分泌物,置无菌试管中送检。避免阴道分泌物污染拭子。 （3）、宫腔分泌物：在必要时用外套保护膜的灭菌导管抽取。
（4）、前列腺液：清洗尿道、冲洗膀胱后用前列腺按摩法采取前列腺液于无菌容器内送检。
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（5）、精液:受检者应5天未排精,清洗尿道后手淫或体外排精法,射精于无菌容器内送检。
（6）、溃疡分泌物：灭菌生理盐水溶液清洗患处,用无菌拭子取其边缘或基底部的分泌物,置无菌试管中送检。 11、烧伤感染培养标本
烧伤 12h 后无菌棉拭子操做采集标本；要注意从多个创面取样,烧伤严重感染时易发生败血症,创棉取样同时应采集血样送做血培养(必须同时做需氧菌培养和厌氧菌培养) 。
12、厌氧菌感染培养标本 （1）、标本采集
① 标本不能被正常菌群污染,采集时尽量避免接触空气,立即送检,严格遵守无菌操作；② 血液及其他体液(胸水、腹水、心包液、关节液、胆汁、脑脊液等)注入厌氧血培养,立即送检；③ 深部脓肿,在病灶部位开放前取材,可用针管抽取,针头用无菌胶塞密封,也可用血气采集针抽取,立即送检；④ 抽出液体标本后,要尽快排除注射器内的空气。 （2）、标本运送
① 标本采集后不得冰箱储存,必须尽快(半小时内)送实验室；② 运送方法:a注射器运送(标本抽取后尽快排除空气)或接种道专门的运送培养基中直接运送b含运送培养基的无氧小瓶运送c 厌氧罐运送(组织块);d 大量液体标本运送时要装满标本瓶兵立即驱氧,加盖运送e 一般不采用棉拭子法； （3）、建议使用微生物检验组合:
① 细菌学涂片:快速回报标本中可能的病原微生物；② 普通细菌培养：(3天)；③ 厌氧培养：(7天)；④ 真菌培养：(5 天)；⑤ 微生物分子生物学检测：(2天)
13、真菌感染培养标本 （1）、浅部真菌感染标本采集
①皮肤：常规消毒皮肤，从皮肤癣菌皮损边缘刮取鳞屑，置无菌平皿内送检，皮肤溃疡则采集病损边缘脓汁或组织；②指(趾)指甲消毒指(趾)指甲并去掉其表面部分，取可疑病变部分，用刀片修成小薄片 5～6 片置无菌容器内送检；③毛发：采集根部断折处，至少5～6 根送检。 （2）、深部真菌感染标本采集
① 血液：无菌采血8～10 m1，注入未用过抗生素的或可中和抗生素的血培养瓶中，立刻送检，如不能立刻送检时血培养瓶应放室温，但不可超过 8~9h；
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